荧光定量PCR检测发酵豆酱中黄曲霉毒素相关基因nor-1.pdfVIP

荧光定量 PCR检测发酵豆酱中黄 曲霉毒素相关基因nor-1 晏丽 ，孙秀兰 ，张银志 ，赵建新 ，王淼 1(江南大学食 品学院，江苏 无锡 ，214122) 2(江南大学 食 品科学与技术 国家重点实验室，江苏 无锡 ，214122) 摘 要 建立 了TaqMan荧光定量 PCR快速检测产黄 曲霉毒素 曲霉菌的方法 ，并将其应用于发酵豆酱 中。以黄 曲霉毒素合成相关结构基 因nor-1基 因作为靶标基 因，设计特异性引物及 TaqMan探针，以含 nor．1基 因的质粒 为模板建立标准 曲线，将其应用于豆酱发酵过程 中nor一1基 因的动态监测 ，并与传统平板培养法测定产毒 曲霉菌 结果相 比较。结果显示 ，两检测方法呈较好 的相关性，Pearson等级相关系数为0．808，P=0．098。灵敏度及特异 性检测结果显示 ，该方法灵敏度达 IOCFU／mL，特异性针对含 nor-1基 因的曲霉菌。所建立 的方法检测时间短， 仅 6h即能完成整个过程，相比传统平板培养法，具有优势。该研究在国内首次建立了快速、灵敏、准确的荧光定 量检测方法检测豆酱 中黄 曲霉毒素相关基 因nor一1，能够在黄 曲霉毒素产生前期，对产毒 曲霉菌污染状况进行监 测 以更好控制食 品中黄 曲霉毒素，提高食品安全性。 关键词 nor一1基 因，荧光定量 PCR，产毒 曲霉菌，快速 ，安全性 黄曲霉毒素是一组真菌毒素 ，已知能够产生黄曲 测方法应运而生 ，Yong和 Cousin等 应用免疫学方 霉毒素 的真菌有 4种 ，分别是黄 曲霉 菌 (Aspergillus 法检测产黄曲霉毒素曲霉 菌，适用于大量样 品的检 flavus)、寄生 曲霉 菌 (Aspergillusparasiticus)、特 曲霉 测。但因其样品基质 的复杂性 、抗体 的特异性 、假 阳 (Aspergillusnomius)和假溜 曲霉 (Aspergilluspseudota— 性的问题而受到了一定的限制 。 marii)，其 中黄曲霉和寄生 曲霉是主要产生者 。 PCR技术步骤简单 ，成本较低 ，快速灵敏。样本 我国产黄曲霉毒素的菌种主要为黄陆霉。 菌体无需或仅需微量培养，无需纯化步骤 ，可以在黄 黄曲霉毒素是一种剧毒和强致癌物质 ，为迄今发 曲霉毒素产生之前预先检测到潜藏于食 品或饲料 中 现的各种真菌毒素中最稳定的一种 ，1988年即定为 I 的产黄曲霉毒素真菌 ，减少经济损失 ，现阶段已成为 级致癌物 ，其毒性为氰化钾 的 10倍 、砒霜 的 68倍。 产黄 曲霉毒素 曲霉 菌检测 的热点。Chen等 用 它的分布范围很广 ，几乎所有谷物 、饲草和各种食 品 PCR方法鉴定产黄曲霉毒素菌和用四重 PCR检测花 (包括畜产 品)都可作为产黄 曲霉毒素菌的生长基 生仁 中产黄 曲霉毒素 的寄生 曲霉。Zachova等 研 质，严重危害人类 的健康 ，一直受到各 国的关注 。 究了用 PCR方法特异性地检测饲料 中产黄曲霉毒素 据 FAO报道 ，全球每年约有 25％的农作物遭受霉菌 菌的可能性。Scherm等 研究 了用反转录 PCR方 及其毒素的污染 ，约有2％的农作物因污染严重而失 法区分黄曲霉以及寄生 曲霉 中的产毒菌株和非产毒 去营养和经济价值 。 菌株的可行性 。秦彦文等 、谢红梅等 ¨用多重 而预防黄曲霉毒素的危害 ，首要条件是能够在污 PCR方法来检测潜藏性产黄 曲霉毒素 (AF)真菌。 染早期快速准确地检测谷物、食品是否受潜在产黄曲 A．DelFiore等 ¨研究用 PCR方法检测玉米仁中的 霉毒素 曲霉菌的污染。但 国内外研究的焦点主要集 产黄曲霉毒素真菌。 中在黄 曲霉毒素 的检测方法 ，针对产黄曲霉毒素菌株 分子遗传学分析表 明，黄曲霉毒素合成相关结构 检测的方法报道较少。传统检测主要采用形态学、鉴