石蒜凝集素的纯化、性质及构象研究单子叶石蒜科植物朱顶红和风雨花甘露糖结合凝集素基因的克隆及序列分析.pdf

第一部分 radiata 石蒜凝集素(Lycoris 纯化、性质及构象研究 艇物化学与分子生物学专业 研究生：是传芳 指导老师：鲍锦库 攘黉：本文对石蒜凝集寨瓣礤究圭要包括缝化、性成、活瞧以及缝孝句几个方嚣。 radiata)球茎经匀浆、没取、硫酸铵分缀沉淀襻到粗晶，将 石蒜(Lycoris 明LRA是由四个相同亚基组成的蛋白。LRA能凝集兔血细脆和大肠杆菌，其凝 鬃兔血细胞和大肠杆菌缨胞的效价分别为0。95 ug／mL和Lgug／mL，对夕卜周斑淋 巴细胞兵肖很强的促有罄分裂能力；糖抑制实验缩采表明．甘露聚糖积甲状腺 球蛋白能抑铡LRA的凝血活性；对酵母细胞的凝榘实验袭明，LRA能凝集啤酒 酵母细胞；，在抗瘸毒活髋方面，LRA髓肖效造降低II黧人类举纯癔疹病毒 缁胞无纲胞毒性， I‰=5-10=g／mL之阉；在抗爱滋病瘸毒实验申，乙RA能有 + 蹩一种裔效的抗瘸毒蛋裔。 我时静LRA分予麓一种特异往韵商圣一新叠蛋鑫筑。LRA豹荧竞光谱磷究表嚼 柱激发光波长为280hm时，其最丈荧光发射峰在338nm处，荧光光谱未见有酪 氮酸(Tyr)残基的发射蜂，表明Tyr残基的荧光蒸本上通过髓囊转移到Trp 上，饿荧光强度增强，在激发光谱为295nm时，其最大袋光发射峰338nm。比 弱，处乎疏水的微环境。研究不间温度、pH和纂团特异性化学修饰后LRA凝 趣活後氍憾淋巴缎胞奄缝分袋翡交纯、豳二惫港和荧光光谱酶嶷纯，当瀑度这 80C戳上懿，滔性拜始下海，翊100C辩淫馊囊60％／象蟹；当鲻为2潜，活洼 保留50％，pH为4一i2对活髋的影响不大；用糯s修饰Trp后，Trp的§一吲哚 基的破坏使活性完全键失，寝明Trp对凝血活性燕至关重要的，twg、Tyr、 促有缝分裂活性降低．耀DEPC对缀氨酸豹量一眯唑基进行特异化学修馋矮，其 凝血活性甫明显的下降，表明昼一咪睦蒸是凝敷活性的必需基丽。衙圜：二色谱 的研究表明结构的变纯先予潘瞧的交他，先蘧缩构开始变纯，健活，陡中心路构 篾寒酸坯，接着结构秘进一步变化馒活性逐步丧失，表明LPA具有较强的抗变 性能力。研究了不同溉度、pH和特异化学修饰后LRA的荧光光谱变化，发现 澄度鹣弁嵩稻鲻懿改变对荧走兜谱影嚼苓丈，Tyr豹惨镪傻荧蠢强度酶羝； 嚣爝羰蒎、Ki翻氮纯镱均戆够镬LRA豹荧竞淬灭，嚣爝魏胺镱淬灭93。8堤琶氨 酸残熬能荧光；用N麟做惨饰剂测定乙RA的可反应巯纂数和总巯凑数，发现 LRA中不禽巯基，用院色法灞定LRA中Trp静含鬣为5．3冁，霜NBs修饰对，溅 缛鸯分予L魁孛含有12．4个Trp残基，即每个亚基约会3个Trp残基。 关键词：《蒜凝集素； 努离筑健： 纯学骖馋i 荧光竞谮； 霞二色谱； 荧光漆灭；撬瘸毒潘馁 2 onp疆rifiea专主on， and Study of radiatainin Conformation Lycoris Agglut and Molecular Biochemistry Biology Major i sot：BaoJin—ku Author：Wu Superv Chuan—fang on radiaca