用一种新方法检测尼古丁减轻鱼藤酮对犝犘犛的毒性.pdfVIP

第 卷第 期 西 安 交 通 大 学 学 报 （医 学 版 ） ３５ １ 犞狅犾．３５犖狅．１ 年 月 （ ） ２０１４ １ 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻犪狀犑犻犪狅狋狅狀 犝狀犻狏犲狉狊犻狋 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 犑犪狀．２０１４ 犵 狔 ◇方法学研究◇ 用一种新方法检测尼古丁减轻鱼藤酮对 犝犘犛的毒性 石 婕，邓永宁，刘 洁，屈秋民 　 　 （西安交通大学医学院第一附属医院神经内科，陕西西安 ７１００６１） 　 摘要：目的 建立一种动态检测泛素 蛋白酶系统（ ）活性的新方法，并利用此方法观察尼古丁对鱼藤酮诱导的  ＵＰＳ 　 ＵＰＳ功能障碍的影响。方法 合成 ＵＰＳ降解信号 ＣＬ１，将其与含有绿色荧光蛋白的质粒 ＥＧＦＰＣ１连接，构建 ＣＬ１ 　 ｐ ＥＧＦＰＣ１质粒并转染 ＰＣ１２细胞，经 Ｇ４１８筛选后得到稳定表达的ＣＬ１ＥＧＦＰＣ１细胞系。蛋白酶抑制剂 ＭＧ１３２、 ｐ ｐ 鱼藤酮或尼古丁 鱼藤酮处理细胞，应用免疫印迹技术检测细胞内 含量的变化，荧光显微镜观察细胞荧光强度 ＋ ＧＦＰ 的变化。结果 稳定转染的 ＣＬ１ＥＧＦＰＣ１细胞无绿色荧光，而 ＭＧ１３２处理后细胞内绿色荧光显著增加，且随 　 ｐ 浓度增加荧光强度逐渐增加， 表达逐渐增高（ ）。鱼藤酮处理后细胞内绿色荧光显著增加， ＭＧ１３２ ＧＦＰ 犘 ０．０５ ＧＦＰ ＜ 含量明显高于非处理组（ ）。低浓度尼古丁处理组细胞内荧光强度显著降低， 蛋白表达显著减少，高浓度 犘 ０．０５ ＧＦＰ ＜ 尼古丁处理组细胞内荧光强度降低更加显著， 蛋白表达减少更明显（ ）。结论 成功建立了能够在活细 ＧＦＰ 犘 ０．０５ ＜ 　 胞中全面、动态检测 ＵＰＳ活性的方法。鱼藤酮可降低 ＵＰＳ活性，尼古丁可减轻鱼藤酮引起的ＵＰＳ功能障碍。 关键词：泛素 蛋白酶系统；尼古丁；鱼藤酮；帕金森病  中图分类号： 文献标志码： 文章编号： （ ） Ｒ７４２．５ Ａ １６７１８２５９２０１４０１０１３２０４ 　　　 　　　 ： ／ 犇犗犐１０．７６５２ ｄｘｂ２０１４０１０３０ ｊ