ipt基因促进矮牵牛遗传转化效率及热激启动子驱动基因删除.pdfVIP

基 组学与应用生物学，2011年 ，第 30卷 ，第 2期，第 145—151页 Genom icsandAppliedBiology，2011，Vo1．30，No．2，145—151 研究报告 A Letter p／t基因促进矮牵牛遗传转化效率及热激启动子驱动基 因删除 李岩 ，， 赵德刚- 1贵州大学贵州省农业生物工程重点实验室，贵阳，550025；2贵卅f大学生命科学学院基因工程实验室，贵阳，550025；3教育部绿色农药与农业 生物工程重点实验室，贵阳，550025 通讯作者，dgzhao@yahoo．corn 摘 要 本研究主要探讨 ipt基因对矮牵牛遗传转化不定芽诱导影响及拟南芥热激启动子 hspl8．2驱动重 组酶基 因 的热诱导外源基因删除表达载体在矮牵牛 中的基 因删 除效果 。本研究中将植物表达载体 pBin．hsp18．2：tTp一35S：／pt及对照载体pBin—hsp18．2：tip遗传转化矮牵牛，以获得转基因植株 ，分析 比较不定 芽的诱导和转基因植株进行的热激基 因删 除。研究结果表明，p／t基因可促进矮牵牛遗传转化过程中不定芽 的诱导，其不定芽诱导率为21．5％，显著高于对照的8．7％。在 44~C，6h，热激 6次的条件下，转基因矮牵牛植 株表型恢复正常，经 GUS蛋 白表达分析及 PCR、RTPCR检测 ，证 明外源基因已经被删除。转基因矮牵牛基 因删除效率最高可达 43．8％。本研究为 基因在一些遗传转化 困难植物转基 因中的应用奠定了基础 。 关键词 矮牵牛，重组酶基因，异戊烯基转移酶基因，基 因删除 GeneticTransformationEfficiencyEnhancedby p／tGeneandHeatShock PromoterDrivenGeneExcisioninPetunia LiYan ， ZhaoDegang ’’ 1GuizhouKeyLaboratoryofAgro-Bioengineering，GuizhouUniversity，Guiyang，550025；2TheLaboratory ofGeneEngineering，CollegeofLifeSci— ences，GuizhouUniversity，Guiyang，550025；3KeyLaboratory ofGreenPesticideandAgriculturalBiologicalEngineeringMinistry ofEducation， Guiyang，550025 Correspondingauthor，dgzhao@yahoo．com D0I：10．3969／gab030000145 Abstract Inthisresearch，wesutdiedtheinfluenceofpeutniashootregenerationwhentransformedwithp／tgene， andgenedeletioneffectoftheheatshockinducible “genedeletion”constructioninwhichflpgenewasdrivenby thepromoterhspl8．2．WetransformedconstructionsofpBin—hspl8．2：tip一35S：p／tandpBin—hspl8．2：tipinto petuniaaxilaris，togaintransgenicplant．WeanalyzedshootregenerationbetweenpBin-hspl8．2：flp一35S：p／tand pBin—hsp18．2：tiptransfomredplant．studiedgenedeletionefficiencywithheatshock．Theresultsshowedthatp／t genecanenhanceadventitiousshootsregenerationofpetunia．TheshootsinductivityofpBin—hspl8．2：flp一35S：p／t linesis21．5％evidentlyhigherthanpBin—hsp18．2：tiplineswhichare8．7％．Furthermore．thephenotypeoftrans— genicplantbecamerecoverybyheatshock，whichtreatmentconditionswasbeatshockundertemperautreof44~C for6h，andheatshockofr6times．Itprovedthe