食管鳞状细胞癌染色体13q1213 杂合性丢失.DOCVIP

临床医学论文-食管鳞状细胞癌染色体13q1213 杂合性丢失 ???????? 作者：李光， 张海峰，王军梅， 徐妙生 ，王全红? 【摘要】? 目的 分析食管鳞状细胞癌 (ESCC) 在13号染色体长臂1213区（13q1213）上的等位基因杂合性丢失（LOH），以期寻找13q1213区上可能存在的与ESCC有关肿瘤抑制基因（TSG）的缺失区域。方法 用8个位于13q1213区的微卫星标志物，对56例ESCC患者进行PCRLOH分析，56例ESCC患者包括34例有上消化道癌家族史，22例无上消化道癌家族史。结果 56例ESCC患者中，48例（86%）显示一个或更多位点LOH；并发现一个LOH高频率区，位于位点D13S267和D13S219 之间，物理距离仅有2.83Mb；在位点D13S1242有上消化道癌家族史组LOH为68%，明显高于无上消化道癌家族史组的18%，(P=0.003); 在位点D13S289有上消化道癌家族史组LOH为82%，明显高于无上消化道癌家族史组的31%(P=0.008),有显著意义。结论 研究提示染色体13q1213的LOH可能在食管癌发生发展中起重要作用，在染色体13q1213区上，可能存在一个或多个与ESCC发生发展有关肿瘤抑制基因（TSG）。 【关键词】? 食管鳞状细胞癌 ；杂合性丢失；肿瘤抑制基因 ??? Loss of Heterozygosity on Chromosome 13q1213 in Esophageal Squamous Cell Carcinoma ??? Key words：Esophageal squamous cell carcinoma;Loss of heterozygosity;Tumor suppression genes ??? 食管癌是中国最常见的恶性肿瘤之一，70年代曾占中国人恶性肿瘤死亡的第2位[1]，现在仍居第4位[2]。而世界上70%的食管癌病例集中在中国，中国北方一些地区食管癌的发病率是世界最高的[3]。根据Knudson[4]抑癌基因失活形式的理论，检测肿瘤细胞染色体上特定DNA多态标记，分析杂合性丢失（Loss of heterozyosity, LOH）已成为目前检测肿瘤抑制基因（tumor suppressor gene, TSG）失活和发现及定位新的肿瘤抑制基因的重要手段之一。本研究应用聚合酶连反应（PCR）方法分析56例食管鳞状细胞癌13号染色体长臂1213区（13q1213），8个位点微卫星多态标记物的LOH，以期寻找染色体13q1213区上可能存在的与ESCC有关的肿瘤抑制基因TSG的缺丢区域。 ??? 1? 材料与方法 ??? 1.1? 标本 ??? 56例ESCC标本取自山西省肿瘤医院1995年1月～1996年12月手术切除标本，其中食管上段1例，中段46例，下段9例。术前取10mL患者静脉血，患者年龄37～65岁，平均54.5岁。男性34例，女性22例。34例有上消化道癌家族史，22例无上消化道癌家族史。标本90%乙醇固定，石蜡包埋。 ??? 1.2? 激光显微切割和DNA提取 ??? 患者静脉血DNA提取,用标准DNA抽提方法，2μL作为DNA模板用于PCR反应正常对照。肿瘤细胞显微切割在光镜下进行，具体方法如文献所述[5，6]。激光显微切割仪为（Laser capture microdissection LCM）Pixcell Ⅱ 100 ; Arcturus Engineering, Mountain view, CA） 切割下的细胞立即悬浮于50μL显微切割消化液中；消化液包含0.01M triHCl; 1mM MEDTA,1%Tween20,? 0.05mg/mL蛋白酶K，PH8.0，孵化37℃ 48h，混合液95℃ 10min，灭活蛋白酶K，2μL作为DNA模板用于PCR反应。 ??? 1.3? LOH分析 ??? 1.3.1? 微卫星呈多态标记及PCR反应选择染色体物理定位于13q1213上8个位点的微卫星标志：其中，D13S1242，D13S217，D13S289，D13S290，D13S260位于13q12.12;D13S267，D13A220，D13S219，位于13q12.313.1,进行LOH分析。微卫星引物购自美国Reserch Genetric公司。在10μL PCR反应体系中加入基因组DNA（肿瘤或静脉血）2μL（约含DNA100ng），1μL 10×PCR缓冲液，dNTP200 μmol/L，一对引物各2μmol/L，gold Ampli Taq DNA 聚合酶0.25u，1μci [α32P]dCTP, 加水至10μL后，加入10μL矿物油覆盖反应液，