HLADPB1等位基因与四川汉族人哮喘相关性研究.docVIP

HLA-DPB1 等位基因与四川汉族人哮喘 相关性的研究  摘  要  目的：用聚合酶链式反应－限制性片断长度多态性（polymerase chain reaction –restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）分析法，检 测中国四川汉族人 HLA-DPB1 基因多态性，探讨 HLA-DPB1 基因多态性与 哮喘之间是否存在相关性，从基因水平探讨支气管哮喘的发病机制。方法： 采集支气管哮喘患者(asthmatic patients，P)外周抗凝全血 39 例，正常对照者 （normal control，N）外周抗凝全血 48 例，其中 N、P 各有 6 例新鲜全血， 其余均在-70保存 1 周以上。采用改良的 NaCl 快速盐析法分别提取新鲜全 血和冻存全血的 DNA，比较各组之间的 DNA 的浓度与纯度的差异。利用聚 合酶链式反应（PCR）技术对 HLA-DPB1 基因高度可变区第二外显子（exon 2）进行体外扩增；后用限制性内切酶对 PCR 扩增产物进行酶切，以分析相 应的 HLA-DPB1 等位基因，即：提取出外周全血 DNA 后，用 PCR 扩增阳性 内对照人类生长激素（HGH）和 HLA-DPB1 第二外显子目的基因，经 2％琼 脂糖凝胶电泳检测有否目的基因的产生。再分别用 Ban II、Fok I、Dde I、Rsa I、EcoN I、BstU I 六种限制性内切酶，对 PCR 扩增产物进行酶切，酶切完毕 用 4％琼脂糖凝胶电泳分离酶切片断，根据酶切片断格局确定相应的基因型 别，采用四格表卡方检验比较正常组和哮喘组基因频率的差异。结果：支气 管哮喘组新鲜全血的 DNA 浓度为 797～958μg/ml，DNA 的 OD260/OD280 的比 值为 1.64±0.11；冻存全血的 DNA 为 767～981μg/ml，DNA 的 OD260/OD280 为 1.70±0.05；正常对照组新鲜全血的 DNA 为 713～963μg/ml，DNA 的 OD260/OD280 为 1.62±0.07；冻存全血的 DNA 为 745～1000μg/ml，DNA 的 3 OD260/OD280 为 1.84±0.07。新鲜全血和冻存全血的 DNA 浓度及纯度经统计学 比较，P0.05，差异无显著性。提取的 DNA 经 1%琼脂糖凝胶电泳 DNA 带 型整齐，无明显降解及拖尾弥散。PCR 扩增在 327bp 和 429bp 位置分别有 HLA-DPB1 exon 2 和 HGH 目的基因的产生。限制性内切酶酶切 HLA-DPB1 后，在哮喘组检测到 DPB1*0201、DPB1*0202、DPB1*0401、DPB1*0501、 DPB1*2201 等 10 种等位基因，正常对照组检测到 DPB1*0201、DPB1*0501、 DPB1*0402 等 9 种等位基因。其中哮喘组 HLA-DPB1*0201 出现频率为 1?33 例，对照组出现频率为 9?42 例，经四格表卡方检验 HLA-DPB1*0201 在哮喘 患者组的出现频率低于对照组，差异有显著性（P0.05， RR=0.1151）； HLA-DPB1*0501 在哮喘组出现频率为 10?33 例，也低于对照组的 16?42 例， 但经统计学检验后, 差异无显著性（P0.05）。哮喘组 HLA-DPB1*2201 出现 频率为 6?33 例高于对照组 2?42 例，RR=4.44，但经统计学检验差异无显著性 （P0.05）。结论： HLA-DPB1*0201 在哮喘患者组的出现频率低于对照组， 提示 HLA-DPB1*0201 可能为哮喘的抗性基因，即携带有 HLA-DPB1*0201 的个体患哮喘的可能性相对较小。 关键词: HLA-DPB1 等位基因；支气管哮喘；汉族；多聚酶链反应；限 制性片断长度多态性 4 A Study on the associations between HLA-DPB1 loci and asthma of Sichuan Hans′individuals Abstract Objective: The genetic polymorphism of the HLA-DPB1 loci was analyzed in 33 unrelated Sichuan Hans ′ individuals by polymerase chain reaction–restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP), in order to study certain HLA-DPB1 alleles as