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山羊体外受精及其影响因素的研究 摘要 为了改善山羊体外受精技术，建立一套比较完善的山羊体外受精的操 作体系，并为即将进行的转基因动物的研究提供良好的技术平台，本实验 探讨了体外受精各个环节中报道得比较多的影响因素对山羊体外受精的影 响，提出了一套优化的方法体系。 f实验比较了切剖法和抽吸法从屠宰山羊卵巢表面卵泡采集得到的可用 卵母细胞数。结果表明切剖法采集得到的可用卵母细胞数显著高于抽吸法 (3．70枚／卵巢vs2．31枚／卵巢)。用切剖法采集不同季节屠宰山羊的卵巢卵母 细胞，结果表明不同季节采集的卵母细胞数差异显著，非繁殖季节的山羊 卵巢可采集到更多的可用卵母细胞(4．13枚／卵巢vs3．42枚／卵巢)。 分别统计繁殖季节和非繁殖季节采集得到的卵母细胞的成熟率，结果 表明不同季节采集的卵母细胞体外成熟率有显著差异(61．3％vs72．5％)。山 采集的卵母细胞成熟率显著低于20～30℃之间存放的卵巢采集的卵母细 胞成熟率。用FSH／LH作为激素来源和用HMG作为激素来源对卵母细胞 和EGS时，成熟率分别为70．3％和71．5％，无显著差异。另外，卵母细胞 um、150l-t um、中16012 的直径为中150 m巾160 m时，成熟率分 la 别为O．74％、69．5％和71．6％，表明卵母细胞直径小于150m时不能用于 体外成熟。成熟培养时间为16小时、20小时、24小时和24小时的成熟率 胞能最大程度地达到核质成熟。 精子用离一陇、上游法、稀释法处理后，得到的活力和获能率表明， u 上游法更有利于山羊的精子处理。洗涤后的精子放入含有50g／ml的肝素 DM、m 的TALP、m uM gt 时的获能率分别为47．5％、45％、53．8％，0．2M处理的精子的活力显著 可见FCS对精子的存活有利。 52．3％、50．8％、41．7％，在TALP和mDM液中的受精率显著高于在 对受精率并无提高。受精时间为8小时，17小时，24小时的受精率分别为 果。 结果表明卵裂率在四组培养液之间无显著差异。在没有输卵管上皮细胞共 培养时，培养液中添加或不添加氨基酸混合物、添加血清和(或)BSA对 细胞或输卵管上皮细胞共培养．其卵裂率和8细胞发育率分别为：46．8％， VII 26．2％；472％，30．7％。结果表明，山羊的输卵管上皮和卵丘细胞对体外 受精胚胎的 ／极据以 宰山羊卵巢 1．t 细胞，挑选直径大于150113．的卵母细胞进行体外成熟，培养液中添加HMG 和E2，培养时间为27小时。精子用上游法处理，在mDM液中获能2～3 M， 小时后可用于体外受精；若用IA23187处理山羊精子，则浓度为O．’u ’ 共培养细胞类型对发育率无明显影响。 关键词：山羊，卵母细胞，精子，体外受精，受精率，卵裂率 on invitrofertilization Study goat andit’Sbeneficialfactors Abstract Theaimofthis wasto an IVF for