芥菜BrassicajunceaCoss植株原位真空渗入遗传转化体系的研究.pdfVIP

中文摘要 中文 摘 要 份ANIrF丰富，，培面积广泛.。在生产上存在着病虫害严重、产量低、品质差等问题。 解涵根本途径是培育新品种，常规育种不仅年限长，而且目标性状常常与不良经济性状呈紧 密连锁关系。转基因技术能将目标基因直接导入植物染色体组中，育种效率高。国内关于芥菜 遗传转化技术还很不成熟，难以适宜育种需求。真空渗入法以其独特的优点受到了广泛的关注 本试验通过对影响转化效果诸因素的研究试图建立芥菜植株原位真空渗入高效遗传转 为该法的广泛应用提供理论依据和方法技术。 本项研究于1999年6月至2001年5月，以芥菜雪里燕和园叶芥为材料，采用人工低温处 理和春秋播期试验以及对影响原位真空渗入遗传转化效果的真空渗入时间、菌液浓度、渗入培 养基、芥菜生长发育时期、组织器官和农杆菌菌株进行处理试验，建立了芥菜原位真空渗入遗 传转化体系、冬*了以下主要结果: l.雪里族和图叶芥芥菜种子经50C温烫10min.23}C浸种2-6h，催芽20h，或23C浸种5h 不催芽，置0-4℃处理25d:圆叶芥9月20日、9月30日和2月27日，雪里燕9月30日和2 月27日璐地播种，均易形成芥菜植株原位真空渗入遗传转化适宜苗态。 2.通过对影响转化效果的诸因素的研究，建立了芥菜植株原位真空渗入离效遗传转化方法: 真空渗入时间为2min/间歇306/30s或2min/间歇1.5min/30so菌液浓度OD,,为0.8-1.2,渗入培 养荃为1/2MS无机+B3林:菌株采用强感染型的;在蓄期对花曹进行真空渗入。 3.初步建立一种鉴定转基因植株的方法— 生长点点滴筛选法，该法筛选雪里燕和圆叶芥 的最佳潮霉素浓度为mL/8900, 筛选时间自接种潮祥素后10d开始。筛选转化体的标准:真叶 长出，叶色显绿，生长正常.由于其不需要培养基，无污染，节省药品，筛选出的转化体移栽 成活率高，具有一定的应用前景。 4.建立了培养基筛选芥菜转基因植株的湘祥素最佳浓度和筛选最佳时期.25mgJL为芥菜 雪里燕和圆叶芥潮稼素筛选的最佳浓度;筛选的最佳时间从 16日龄开始。鉴别转化体的标准: 在潮祥素浓度为25m叭 的筛选培养基上，16日龄以上的雪里族和圆叶芥植株生长正常，叶片现 绿，有侧根发出或真叶长出或既有侧根又有真叶出现。 / 5.参考微tIDNA提取方法，成功地提取了用于PCR扩增的芥菜DNA，并建立了PCR扩 增反应体系。 6.获得了转基因植株。本试验经潮霉素筛选获抗性苗396棵，随机取样七棵，对其提取基 、 、 因组DNA，进行PCR分子检测，均有条带扩出，证明外源基因已整合在芥菜荃因组DNA上。了 J 了 关健词:芥菜 遗传转化 真空渗入法 芥菜植株原位真空渗入遗传转化体系的研究 Studiesonthegenetictransformationsystemofplantinsituvacuum infiltrationinBrassicajuncea Postgraduate:7inWanmei Tutor:Prof.GongZhenhui Abstract Mustards(BrassicajwuceaCoss.)iswidelyplantedanditsanutritivevegetable.Butthereexist seriousplantdiseasesandinsectpests Lowyieldandbadquality.onlyresolv