葡萄无核基因分子标记的研究.pdfVIP

葡萄无核基因分子标记的研究 摘 要 抓分、、、}pIl}}.: 1.18by特异引物在葡萄品种中的验证 本研究利用探测葡萄无核基因的18by特异引物，运用RAPD技术成功地 对37个有核和无核，萄品种的无核基因存在与否进行了分子诊断。合果充分 证明由UBC-269-484序列设计并合成的18by特异引物确实具有检测葡萄无 核基因的功能。于 2.RAPD标记的克隆、测序及SCAR标记的转换 对18by扩增产生的约590by特异片段进行回收、克隆及双向测序，获 得了该片段的全部序列。低序列全长为569bDo经PC-gene软件分析.iq计 并合成了两对特异引物，盯P,+P,和P,+P,,P,,PZ和P,的序列分别是:5CTCATC TTCTTGATGGTGAT3，5GACCAGTCTGCACTTACAGT3，5从GTGA AGAACATCATTAAGAAC3，并对全部供试品种进行PCR扩增，获得了两 个特异片段约530by和 500by，以该两片段出现与否准确地区分了葡萄有 核与无核。这样，成功地将RAPD标记转换为SCAR标记奈 3.RAPD标记和SCAR标记在葡萄无核育种上的应用 利用RAPD标记和SCAR标记对尚未结果的五个有核x无核杂交组合共165 个单株进行了果实有核、无核性状的预先选择，达到了分子标记辅助葡萄无 核选择的目的。 4.Southernblot检测葡萄无核基因 将葡萄无核基因的RAPD标记序列进行二一gen。软件酶切位点分析。随用 HindIII和SpeI两种内切酶对重组质粒进行双酶切处理，获得了310by片 段，经回收纯化、DIG-标记后制成了探测荀萄无核基因存在与否的杂交探针; 并用该探针成功地对无核白、红地球等七个优良葡萄品种进行了Southern blot分析，达到了区分葡萄有核与无核品种的目的。于 、/ 关健词:葡萄无核基因 分子标记:Southernblot 致 谢 本文是在导师王跃进教授、副导师周鹏教授的悉心指导下完成 的。从论文选题、确定研究方案和实验实施的整个过程都得到T导 师的精心指导。导师渊博的科学理论知识，严谨求实的科学态度， 忘我的工作热情以及开拓创新的科研精神，将使我受益终身. 在开题论证过程中，贺普超教授、李嘉瑞教授、范崇辉教授、 许晖副教授、马锋旺副教授、任小林副教授等提出了宝贵的意见及 建议。 新疆部善瓜果开发研究中心骆强伟副研究员为本研究提供了全 部材料和部分资料。 本研究是在中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实 验室完成的。在分子操作过程中，得到了郑学勤教授、陈守才研究 员、黄俊生研究员、金志强教授、张银东教授的关心和指导，梁启 镜先生在生活上给予了诸多关怀。王自章博士、吴坤鑫博士、张致 礼博士、符少萍女士、赖心田先生、方再光先生、杨国峰先生、刘 柱先生和西北农林科技大学的张剑侠老师、王西平老师、万怡震老 师、陆璐博士、郭卫东博士、罗素兰博士、李桂荣同学、潘学军同 学、段朝晖同学、王劲松同学、危会玲同学、徐炎同学等给予了热 情的指导和帮助。 本研究为导师王跃进教授主持的国家自然科学基金项目 和农业部948项目的部分研究内容。 我的工作单位一一洛阳农业高等专科学校领导也曾热情地关注 和过问论文进展情况，果树教研室张益民教授和其他几位教师也为 论文完成提供了方便。 值此论文完成之际，对以上关心我的老师、领导和朋友致以诚 挚的谢意! 杨英军 2000年10月 缩写词 (Abbreviation) Amp Ampicillin 氨节青霉素 dNTP Deoxyribonucleoside 脱氧核糖核昔三磷酸 triphosphat