羊泰勒虫裂殖子蛋白分析及其ELISA诊断方法的建立.pdfVIP

摘 要 羊泰勒虫不同地理分布的虫株在致病力上有很大差异，但不同虫株在蛋白多肤及抗原特性 方面是否存在差异，尚不得而知，为此本试验利用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酞胺凝胶电泳 (SDS )和免疫印迹 (Westernblotting)方法对羊泰勒虫甘南株 (甘肃省)、隆德株 (宁夏回族 治“区，、张家，，，株甘肃‘省，和麻”株甘肃‘省，虫体蛋白进行了分析。介DS结果“ 示，羊泰勒虫甘南株出现了16条带，粗带有 102,71,41,33,29,14kD:隆德株出现了12 条带，粗带有102,71,41,31,29,14kD;张家川株出现714条带，粗带有102,38,33,22, 17,16,14kD;麻当株出现712条带，粗带有102,38,37,27,17,16,14kDe4个虫株蛋 白多肤在数量、含量和分子量上存在差异。对 4个虫株的电泳谱进行了比较，发现羊泰勒虫甘 南株与隆德株的亲源关系较近，与张家川株的亲源关系次之;张家川株与麻当株的亲源关系也 比较近。4个虫株的免疫血清分别与4株虫体蛋白进行了免疫印迹试验，结果表明4株虫体的免 疫血清与甘南株和张家川株在38kD处有共同反应。免疫印迹试验还发现了隆德株虫体在38kD 的多。麻当株虫体在35kD的VA.少一 自感染红细胞内纯化的羊泰勒虫裂殖子，经冻融、超声裂解后，其可溶性抗原过Sephadex G-200，收集蛋白峰，以此作为包被抗原，用常规方法建立了羊泰勒虫病的间接ELISA诊断方 法.特异性试验和敏感性试验证明此法特异性高、重复性好。偷46份阳性血清和48份阴性血 清用ELISA检测，结果阳性检出率为100%，阴性符合率为98.0%。用此方法对人工感染羊和野 外感染羊的抗体消长进行检测，结果显示，人工感染羊于感染后第5d即可检出抗体，30^-40d 达到高峰，抗体滴度为 1:3200，然后下降，并维持在 1:400^-1:800之间:野外自然感染羊的抗 体水平出现了2个峰值，第1峰在3-7月份之间，第2峰在9^-1。月份之间歹而雨省甘南藏 族自治州玛曲县、甘南藏族自治州临挑县、张家川回族自治县和天祝藏族自治县的血清进行了 检测，其阳性率分别为5.7%,93.8%,82.5%和80.0%，与现可查流行病学调查基本一致. 关镇词:羊 泰勒虫 裂殖子蛋白 蛋白分析 ELISA ANALYSISOFTHEME ROZOITEPROTEINOFTHEILERIA SP. ANDDEVELOPMENTOFELISADIAGNOSIS ME THODSFORITSINFECTION Abstract TherewascleardifferenceinpathogenicabilityofTheileriasp.isolatedfromsheepindifferent districtsinChina.MerozoiteproteinsoffourstrainsofTheileriasp.(Gannanstrain,Longdestrain, Zhan自iachuanstrainnadMadangsrtain)wereanalyzedwithSDSnadWesternblottingin ordertoascertainwhethertherearedifferencesinproteinpolypeptidesandcharacteristicsofnatigenof Theileriasp.isolatedrfomsheepindifferentdisrticts.SDSindicatedthat16bnadswereshown inthelnaeofTheileriasp.(Garmnastrain),including6widebnads:102,71,41,33,29and14kD;12 bnadsofTheileriasp.(Longdestrain),including6widebnads:102,71,41,31,29nadl4kD;14bnads ofTheileriasp.(Zhnagjiachunasrtain),including7widebnads:102,38,33,22,17,16nad14kD;12 bandsofTheileriasp.(Madnagsrtain),including7widebands:102,38,37,27,17,16n