Frizzled4 在小鼠毛囊周期中的表达.pdfVIP

第３６卷第７期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．７ ２０１４年４月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　Ａｐｒ．１５　２０１４ ６３１ 文章编号：１０００５４０４（２０１４）０７０６３１０５ 论著 Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４在小鼠毛囊周期中的表达 陈　年，伍津津，邱伟明，唐　辉，唐书谦　　（４０００４２重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科） 　　［摘要］　目的　探讨Ｗｎｔ蛋白的受体分子Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４在小鼠毛囊周期中的表达、功能及其意义。方法　 利用实时定 量ＰＣＲ、ＲＴＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和免疫荧光等技术分别检测Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４ｍＲＮＡ和蛋白在毛囊生长期（Ｐ１ｄ、Ｐ３ｄ、Ｐ８ｄ）、退化期 （Ｐ１６ｄ）和静止期（Ｐ２１ｄ）中的表达。免疫荧光技术检测Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４在小鼠皮肤上皮细胞ＪＢ６ｃｌ３０７ｂ中的定位，ＭＴＴ检测用 抗Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４抗体处理ＪＢ６ｃｌ３０７ｂ细胞后的增殖情况。结果　 在毛囊生长期早期，Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４ｍＲＮＡ和蛋白在Ｐ１ｄ的小鼠背 部皮肤中表达明显，膜表达于Ｂｕｌｇｅ、毛囊外根鞘及毛球外侧。在Ｐ３ｄ，Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４蛋白表达明显上调，主要表达于Ｂｕｌｇｅ、毛 囊外根鞘、内根鞘、ｐｒｅｃｏｒｔｅｘ、部分毛球外侧。在生长中期（Ｐ８ｄ），Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４蛋白的表达最强，集中在毛囊Ｂｕｌｇｅ、外根鞘上段 及内根鞘。当毛囊进入退化期（Ｐ１６ｄ），Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４ｍＲＮＡ和蛋白的表达显著降低（Ｐ＜０．０５），此时主要定位于Ｂｕｇｌｅ。而在 静止期，Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４ｍＲＮＡ和蛋白表达最低（Ｐ＜０．０５），只有少量Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４阳性细胞出现在毛囊 Ｂｕｌｇｅ。免疫荧光技术检测 Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４蛋白同样也在ＪＢ６ｃｌ３０７ｂ细胞膜中表达。ＭＴＴ结果显示与对照组相比，１０ ｇ／ｍＬ的抗 Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４抗体处理ＪＢ６ μ ｃｌ３０７ｂ细胞后光密度值明显降低（Ｐ＜０．０５），而２０ ｇ／ｍＬ的抗 Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４抗体处理后的光密度值降到最低（Ｐ＜０．０５）。 μ 结论　 Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４在毛囊周期中的表达具有时空特异性。伴随着毛囊的生长，Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４的ｍＲＮＡ和蛋白水平都呈现高表 达，随着毛囊的退化而表达降低，直至静止期维持低表达水平。拮抗Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４蛋白的作用促使细胞增殖受到明显抑制，提 示Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４的表达与毛囊细胞的增殖和分化相关。 　　［关键词］　 Ｆｒｉｚｚｌｅｄ４；毛囊；小鼠；Ｗｎｔ；抗体 　　［中图法分类号］　Ｒ３２２．９９１；Ｒ３２９．２８；Ｒ３９４．２　　 ［文献标志码］　Ａ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｏｆＦｒｉｚｚｌｅｄ４ｄｕｒｉｎｇｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｃｙｃｌｅ ＣｈｅｎＮｉａｎ，ＷｕＪｉｎｊｉｎ，ＱｉｕＷｅｉｍｉｎｇ，ＴａｎｇＨｕｉ，ＴａｎｇＳｈｕｑｉａｎ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｒｇｅｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｄａ ｐｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００４２，Ｃｈｉｎａ） 　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＦｒｉｚｚｌｅｄ４，ａｒｅｃｅｐｔｏｒｏｆＷｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｄｕｒｉｎｇｍｏｕｓｅｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｃｙｃｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　 ＱＰＣＲ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇａｎｄｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇｗｅｒｅｕｓｅｄ ｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦｒｉｚｚｌｅｄ４ｉｎｍｏｕｓｅｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｃｙｃｌｅａｔ５ｔｉｍｅｐｏｉｎｔｓ：ｔｈｅｆｉｒ