日本血吸虫雌虫源性基因SjF1克隆、表达及保护性免疫研究.pdf

摘 要 选基因，本研究用$雌虫抗原免疫家兔制备抗血清，对$成虫cDNA 文库进行免疫筛选，将阳性克隆的插入片段进行PCR扩增，并对部 酶磷酸化位点，1个酪氨酸激酶II磷酸化位点和1个豆寇酸位点。 结果表明， 影雌虫免疫血清可识别$特异性抗原分子，新抗原基 因sj．F1作为日本血吸虫病疫苗候选基因的价值值得进一步研究。 利用基因工程技术制备重组蛋白疫苗是日本血吸虫病疫苗研 究的重要领域之一，为了解西一F1能否作为日本血吸虫病疫苗候选 分子，本研究采用PCR法将研一Fl基因从己剪切阳性克隆中扩增出 IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白。经鉴定后分别以FCA 作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫昆明小鼠，观察诱 率；r影Fl以壳聚糖作佐剂经滴鼻免疫获得了25．74％的减虫率和 搏l莩垃论文 以壳聚糖作佐荆经莘蠡膜免疫均能诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染 鹣保护力。 DNA疫营是一静燕有城毒活痰萤鳇有效性萋窿亚蕈位疫鬣懿安全 性的薮型疫蕾。为了避一步探索$．Fl侮为日本盘吸虫癌痰蘑候选 分子的潜力，本研究将s]-F1基因篼隆入真核袭达载体pcDNA3中， 疫苗和重组蛋臼疫荫联合免疫减虫警和减卵率分别提鬻到了 40。42甍誉羹57．16％。结栗表鹱，DNA疫菌霹诱导书鬣产生黎分抗盎 吸虫感染鲍保护力，与重缝蜀一Fl援鑫疫苗联台免疫骰护效袋更好。 重缝活载体疫萤缝模拟自然感染诱导有效黥免疫应答，是曩懿 疫苗研究领域徽有前途的新型疫黼。为了迸～步评估萨F1的免疫 溅性，本研究梅建表瑟震示鑫本瞧吸虫$一Fl爨叁懿夔组链球菌， blot分拆签定萱缀蛋自趣表达 并魇闻羧免疫荧光染色郡Western 媾魄。豁定爱瓣重缀链球蓥经瀵嚣接嵇，单独域与DNA疫蓖联合应 髑免疫跷明小藏，观察诱导产生的减虫和减卵效果。免疫前和免瘸 翁(攻毒感染越)采盘稻囔液焉ELISA法检溅特异性抗体永鼍王。结 檠显示成功构建了表嚣展示送本盘啜虫爵．Fl姻重缝链球越，闯接 兔疫荧光梁爸鞍Westernblot分擀表明整组链球菌麓表达g—Fl并 可稳定遗传。煎组g。F1链球菌经滴鼻免疫获得了21．45％的减虫率 博士擎往论文 全文中文擒爱 果表秘，重缝醪Fl链球麓经滴鼻免痰能诱菇小蔑产生部分抗盘啜 DNA疫苗联合能提高免疫保护效果。 虫感染的傈护力，与$一F1 重组链球菌能定居在小鼠口咽部，并可使外源鬻自分子在体内 持续稳定地表达。为了探讨IFN吖对重组影．F1链球菌疫苗的免疫 球蓥，并用Streakblot釉Western blot分析鉴定重组链珐菌蛇 表达情况。鉴定后的重组mIFN一丫链球躺与重组$．Fl链球菌疫苗联 合应用，经滴鼻接种免疫昆明小鼠，观察诱导产生的减虫和减卵效 架。 结采显示成功梅建了分泌mlFN．v重组链球菌。Streakblot和 Western 疫保护性实验表明，重组mlFN一丫链球菌与重组$一Fl链球菌疫苗联 链球菌疫苗比较轻微增加，僵统计学上无显著性差异。缩栗表明， 重组mIFN：7链球蕊能轻徽地增强重组露．Fl链球菌抗壶暖虫感染粒 保护力，但无显著意义。 关键词 疫 博士学位论文 全义英文摘蟹 ABSTRACT Inordertocloneandcharacterizenew vaccine genesencoding candidatemoleculesof adult Schistosoma japonicum japonicum，S wor