不同给药方式下三氧化二砷对裸鼠T细胞淋巴瘤模型体内及体外作用实验研究.pdfVIP

不同给药方式下三氧化二砷对裸鼠T细胞淋巴瘤模型 体内及体外作用实验研究 专 业： 肿瘤学 硕士生： 高岩 导师： 黄慧强 教授 摘 要 研究背景： 8位，每年发病2～4／10万人口。目前，T细胞来源的非霍奇金淋巴瘤(NHL) 化疗效果较B细胞来源的NHL差，预后不良，特别是复发难治T细胞NHL预后凶 险。挽救方案均有一定的疗效，有效率在30％～50％，缓解时间较短，长期缓解 约为10％，自体造血干细胞支持下的超大剂量化疗，能够明显提高远期疗效，但 仍有相当部分复发NHL死于本病。因此，临床上仍需寻找新的药物以期能进一步 改善NHL患者预后。 三氧化二砷在20世纪中后期治疗急性早幼粒细胞白血病取得了满意的效果， 随着对砷剂了解的逐步加深，国内外学者已不仅局限应用As203治疗急性早幼粒 细胞白血病，不少学者正在试用于恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等恶性血液病及肝 癌等实体肿瘤，基础研究及lf缶床研究均显示出诱人的应用前景。国内外基础研究 显示As203体外单药、联合其他药物及方法如放疗等均可以抑制多种恶性淋巴瘤 细胞株的增殖。临床方面，单药As203治疗复发难治性恶性淋巴瘤有效率约在 21．4％～75％之间，大多数报道I临床不良反应轻。所以，不少报道认为As203是值 得在复发耐药NHL深入研究的药物之一。国内外多篇As203有关人体内药代动力 学研究显示目前常规剂量给药后3．4h达药物峰浓度，在人体内代谢呈二房室模型 特征，其代谢产物清除主要通过尿液，并且清除迅速，仅在部分组织内蓄积，无 明显血液蓄积作用，可应用于严重肾功能不良的患者。当前临床常规用药多采用 单次多天方式，opo．1～0．2mg／kg，连续治疗14天左右。根据国内外临床使用本药 物经验，严重副反应报道少见，多表现为肝功能轻度异常，Q—T问期延长及轻度 消化道反应等，安全性较佳。因此，按照药代动力学特点及目前临床不良反应情 况，结合当前每天较低剂量较长时间的给予As203的问题，故考虑是否可以改变 目前给药方式，探讨加大每天剂量，缩短整体治疗时间的可行性。 目的： 本文基于国内外众多学者在As203在治疗恶性淋巴瘤的临床及基础学研究 结论，试图通过动物体内外实验，改变常规As203给药方式探讨相同总治疗剂量 下As203不同给药方式治疗淋巴瘤的可行性及相关不良反应研究。本文主要目的 通过AnnexinV／PI双染色法、流式细胞仪及MTT法检测三氧化二砷对鼠源性T 细胞淋巴瘤EIA细胞株的体外抑制作用，验证体内实验可行性。进一步建立裸 鼠T细胞淋巴瘤动物模型，采用不同给药方式研究三氧化二砷对动物体内T细 胞淋巴瘤抗瘤作用，着重观察As203对肿瘤抑瘤率和了耐受性等。初步了解As203 新的给药方法对T细胞淋巴瘤疗效及不良反应的变化情况。为临床更合理应用 As203提供新的科学依据。 1．As203对T细胞淋巴瘤株EL4的体外实验研究 通过MTT法检测8种浓度的三氧化二砷对鼠源性T细胞淋巴瘤EIA细胞株 Max M2酶标仪上以试验波长570nm，参比波长450nm测定 的作用，在Spectra 性孔】X100％测定三氧化二砷对EIA细胞株抑率。流式细胞仪分析、Annexin- V．FITC／PI双标记及电镜检测细胞凋亡比例及凋亡形态变化。结果显示：各浓度 组的As203对T细胞淋巴瘤EL4细胞均存在直接抑制作用，并呈时间及剂量依 赖性。流式细胞分析各浓度均对EL4细胞有一定抑制作用，随着浓度的增 大，凋亡细胞数量逐渐增多。荧光显微镜观察到肿瘤细胞凋亡形态。电镜 下出现典型细胞凋亡小体。 2．As203对T细胞淋巴瘤荷瘤裸鼠移植瘤生长作用的实验研究 建立T细胞淋巴瘤EIA细胞荷瘤裸鼠移植瘤模型，随机分组为实验组和对 2 腹腔注射。检测肿瘤体积变化和瘤重，计算抑瘤率，光镜下观察肿瘤组织病理学 改变，并行组织学观察肝脏病理变化。实验结果为，实验组较对照组肿瘤生长速 2只裸鼠及A14组1 2mg／k