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第 3卷第6期 南 阳 理 工 学 院 学 报 Vo1．3No．6 2011年 11月 JOURNAL OF NANYANG INSTITUTE OF TECHNOLOGY NOV． 2011 低盐刺激下副溶血弧菌基因转录表达分析 杨 雷 ，裴林 国 ，赵清超 ，徐 国昌 ，毛秉豫 (1．南阳理工学院张仲景国医学院 河南 南阳 473004；2．南 阳医学高等专科学校 河南 南阳 473000) 摘 要：目的：应用全基因组 DNA芯片技术分析低盐冷刺激作用下副溶血弧菌基因的转录表达变化。方法：分别 采用 “低盐持续刺激培养(continuousgrowth，CTG)”和 “中间转入低盐环境培养 (shiftgrowth，STG)”。CTG和 STG 下，分别采用含 NaCI浓度为 2％和0．66％的MV一5培养基孵育副溶血弧菌，收集菌体 ，提取 RNA，应用全基 因组 DNA芯片分别 比较两个不 同的转录表达谱基因变化特点，分析其作用规律 。同时，应用实时定量逆转录多聚酶联 反应对芯片结果进行验证 。结果 ：和对照组相 比，STG实验 中，共有 205个基 因的转录表达发生显著性变化 ，上调 的基因 占优势地位 ；CTG实验 中，总计有 298个基 因的转录表达发生显著性变化 ，上、下调 的基 因总体基本趋于平 衡状态 ，没有 明显差异。实时定量逆转录多聚酶联反应结果证实其和芯片数据结果有很强的相关性。结论 ：在低 盐这一 “胁迫环境”下，副溶血弧菌利用其存在的独特而精细的应对机制，能够顽强的生存下来并繁衍生殖 ，这一过 程 中，节 能调节处于调控的核心地位 。 关键词 ：副溶血弧菌；DNA芯片；转录调控 ；氯化钠 ；节能 独特和精细的应对机制 ，可能会涉及生长代谢需求 0 前言 和致病毒力因子等多个方面的转录表达调控变化 。 对 VP的生长和存活而言，对胞外 的高渗透压 副溶血弧菌 ( p口rnnem0 cus，VP)为革兰氏 的适应是一种重要 的基础功能 ，而低盐的环境对其 染色 阴性 嗜盐弧菌 ，在含有 0．5％ 一10％氯化钠 来说是一种 “胁迫环境 ”，人们对于 VP如何适应这 (NaC1)的培养基中均可生长，但是在含有2％ 一4％ 一 “胁迫环境 ”还几乎一无所知。因此有必要利用 NaC1的培养基中生长 比较适宜 ，适宜的生长条件为 DNA芯片比较转录谱技术更为详尽 的从总体上研 温度 37qC，酸度为 pH7．4～8．0。海水 的含盐量及 究在低盐的环境 中可能引发 VP的哪些基因发生较 pH值较好地满足了VP的生长和繁殖。 为显著的转录调控变化 ，从而为进一步的深入研究 VP主要存在于浅海水 中，附着于一些海洋虾蟹 提供理想 的候选靶标。 类和软体生物生物 的体表生长繁殖 ¨“，人们 因为 食用这些带菌的海产 品而可能引发食物中毒。在渔 1 材料与方法 业公司 养殖场和渔 民等对海产品进行收获 、初次加 工和处理 的过程中，很可能将其转移至淡水区域进 1．1 实验菌株 行 “净化 ”处理 J，这将不利于 VP的生长和繁殖。 VP株 LAMVP1(tdh．PCR ，GS．PCR ，KP ) 而在餐饮行业或者个人在食用含海鲜类食品的时候 是从 1996年泰国的一个痢疾患者体 内分离得来 ，属 会使用 “洁净的”淡水对其进行清洗等处理 ，进一步