非洲猪瘟病毒p72蛋白杆状病毒表达系统的构建及其抗原性分析.pdfVIP

第 34卷 第 1期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．34．NO．1 2012 年 1月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Jan． 2012 doi：10．3969~．issn．1008-0589．2012．01．08 非洲猪瘟病毒 p72蛋 白杆状病毒表达系统的构建 及其抗原性分析 侯绍华，柏丽华，郭晓宇，贾 红，姜一瞳，朱鸿飞 (中国农业科学院 北京畜牧兽医研究所 动物医学研究室 ，北京 100193) 摘 要：为研究真核表达非洲猪瘟病毒(ASFV)i要结构蛋 白p72，本研究从含ASFVp72基因全序列的重组 质粒 pGEX．6p．p72中扩增 出1941bp的p72全长基因，将其插入于pFastBacHTa杆状病毒载体中，构建了重组质 粒pFastBacHTa—p72，转化至感受态细胞 DH10Bac中，获得重组杆粒 rBacmid．p72。再将其转染至 sf9昆虫细胞 ， 获得重组杆状病毒。Westernblot和 夹心法ELISA分析表明ASFVp72基因在 昆虫细胞 sf9中获得了正确表达，重 组p72蛋 白可以被特异性抗ASFV血清、p72单克隆抗体识别，表 明该蛋 白特异性强、活性稳定，具有 良好的抗 原性 。为进一步研究p72蛋 白的结构、功能和免疫学特性奠定基础 。 关键词：非洲猪瘟病毒 ；p72蛋白；杆状病毒表达；抗原性 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2012)01．0033．04 Expressionand identificationofAfricanswinefevervirus proteinp72expressedininsectcells HOU Shao—hua，BAILi-hua，GUO Xiao—yu，JIA Hong，JIANG Yi—tong，ZHU Hong—fei (BeijingVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100091，China) Abstract：Toexpressnucleocapsidp72proteinofAfricanswinefevervirus(ASFV)，thep72genewasamplifiedbyPCRand clonedintopFastBacHTavector．TheresultantrecombinantplasmidwastransformedintoDH10Baccompetentcellstoconstruct recombinantBacmid—p72whichwastransfected into SIO insectcellsto generaterecombinantbaculoviurs ． Thep27proteinwas expressedin St9 cellsandidentified by western blotand sandwich ELISA．The recombinantp72 protein wasrecognizedby anti—ASFV positiveseurm andp72MAb，whichcouldbeusedforASFV detectionmethoddevelopment． Keywords：Africanswinefeverviurs；p72protein；baculovirusexpression；antigenicity 非洲猪瘟 (Africanswinefever，ASF)是 由ASF病 动物卫生组织 (OIE)将其列为必须呈报的动物疫病 。 毒(ASFV)引起猪的一种 以高热、淋巴及