热休克蛋白90在糖皮质激素反应性中作用研究.pdfVIP

·65· 热休克蛋白90在糖皮质激素反应性中的作用研究 欧阳涓姜傥 众多免疫损伤性疾病的发生、发展都与机体免疫调节功 一部分PBMC加入lml Trizol试剂后置一70℃保存，用于提取 能紊乱有着密切的关系。根据神经内分泌免疫调节学理论， 碰蚣；一部分PBMC做细胞涂片用于激光共聚焦免疫荧光检 机体免疫活动及其功能状态直接受神经、内分泌系统的调控。 测HSP90表达及分布。 当机体遭受抗原刺激后，一方面会激发机体免疫系统进行防 1．2化学试剂 御；另一方面则可以通过神经、内分泌系统释放大量激素、细 胞因子去调控免疫系统的过度活动，以免造成相应的组织损 清购自杭州四季青公司；地塞米松／DEX购自SIGMA公司 伤。换言之，机体的免疫性损伤与神经、内分泌免疫调控异常 之间不无关系。在人体的神经内分泌免疫调节网络中，下丘 脑一垂体一肾上腺轴的调节对于维持机体自稳状态十分关键， 乙锭／EB购自广州威佳公司。小鼠抗人HSP90单克隆一抗 其中糖皮质激素(GC)作为下丘脑一垂体一肾上腺轴的关键分 子，不仅在体内参与调节机体免疫功能，抑制免疫系统的过度 活跃，而且在体外一直被作为治疗性药物，对INS、哮喘等免 疫损伤性疾病发挥重要的治疗作用。 但是临床上用糖皮质激素治疗的患者对激素治疗的反应 化试剂二厂。 性不尽相同，即呈现GC敏感、依赖甚至抵抗的临床征象。对 1．3引物 于GC抵抗型患者，即使加大临床GC用量，也并不能改善其 症状和预后，反而易导致因大剂量GC使用而引起种种副作 AGGGTTGGG 用的产生。我们既往研究尚发现Ca2抵抗也可能影响其对自 GATGAT CCA CAA 身免疫系统的调节，从而成为免疫性损伤的重要发病机制。 GR引物自行设计，序列为：上游引物：5’1]rA a℃ACCC(卫ACC TCTTCA 因此，极有必要对GC抵抗的机制进行深入探讨。 3’；下游引物：5’GGC GAC CGTCCTTA (E发挥效应要通过其受体。即糖皮质激素受体(GR)。 3’，扩增片段长度475bp。为进行半定量分析 热休克蛋白90(HSP90)作为GR的伴侣蛋白，它主要分布在 CTATGTGGG GCT ACC CAT 细胞浆中。本文对HSP90在GC信号传导中的作用，以及在 CGA3’；下游引物：5’GGA IvGC CAA 不同GC反应性患者中HSP90的表达、分布及与GR受体的 TG3’，扩增片段长度617bp。上述引物均由上海生 关系进行研究，籍以评价其在Ca2反应性中所起的重要作用。 物工程技术公司合成。 l材料与方法 1．4细胞培养 1．1外周血单个核细胞(PBMC)： 体外培养的PBMC提取自肝素抗凝静脉血，标本来源健 康志愿者，在