细胞因子对实验性自身免疫性肌炎淋巴细胞B7表达的影响.DOCVIP

临床医学论文-细胞因子对实验性自身免疫性肌炎淋巴细胞B7表达的影响 ?????????????? 作者：陶唯宜???肖波??彭永??杨欢??李静???谢光洁 【关键词】? 细胞因子 ?【摘要】 目的 探讨B7在实验性自身免疫性肌炎（EAM）发病中的作用及γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、IL-12对其的影响。方法用兔肌肉匀浆免疫小鼠建立EAM模型，观察动物发病情况及肌肉病理改变。取小鼠外周血和脾淋巴细胞进行细胞培养并用细胞因子处理，分别应用流式细胞计和逆转录聚合酶链反应（PCR）检测外周血和脾淋巴细胞B7-1，B7-2蛋白和mRNA的表达及细胞因子对其影响。结果 EAM小鼠外周血和脾淋巴细胞上B7-1、B7-2蛋白的表达明显增强，B7-1、B7-2mRNA的表达与蛋白表达的增加相平行。IFN-γ、TNF-α、IL-12使上述表达明显增强，IL-10则抑制其表达。结论 B7表达与EAM的发病密切相关，细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-12可能通过调节EAM小鼠淋巴细胞B7表达而影响EAM的转归。 关键词 细胞因子 B7分子 EAM RT-PCR 流式细胞计 【Abstract】 Objective To study the effects of IFN-γ，TNF-α，IL-10and IL-12on the B7mRNA and protein expression of lymphocyte in experimental autoimmune myositis（EAM）.Methods FACS and RT-PCR techˉniques were used to assay the expression of B7in EAM lymphocytes and effects of cytokines.Results IFN-γ，TNF-αandIL-12increased the expression of B7，but IL-10inhibited all the expressions.Conclusion IFN-γ，TNF-α，IL-10and IL-12effected the B7expression in EAM lymphocytes. Key words cytokine B7 EAM RT-PCR flow cytometry 实验性自身免疫性肌炎（EAM）是一种人工诱导类似人类多发性肌炎（PM）的动物模型，其病理改变与PM基本一致，即肌纤维的坏死和炎性细胞浸润。已有的研究表明PM发病与T细胞的异常活化有关 ［1，2］ 。T细胞的活化需要第一信号和第二信号参与，第二信号又称协同刺激信号，主要由T细胞上表达的CD28/CTLA-4与抗原递呈细胞（APC）表面的配体B7相互作用所提供 ［3］ 。本实验着重观察B7在EAM中的表达以及IL-10、IL-12、IFN-γ、TNF-α对其影响，试从T细胞活化的角度探讨PM的发病机制。 1 材料与方法 1.1 材料 PE标记的抗B7-1、B7-2单克隆抗体购自美国Pharmingen公司，IL-10、IL-12、rIFN-γ、rTNF-α、RNA提取试剂盒及逆转录试剂盒购自美国Promega公司，B7-1、B7-2、β-actin引物由中科院上海细胞生物研究所合成，弗氏完全佐剂（CFA）及其它免疫试剂购自北京邦定生物公司。 1.2 方法 1.2.1 动物模型和分组 健康雄性昆明小鼠40只（6～8周，25～30g）由湖南医科大学实验动物中心提供。随机分为肌炎组10只（EAM），对照组10只（0.9%NS）。取兔肌肉 ˇ 基金项目:国家自然科学基金资助项目（编号匀浆0.1ml加等量CFA混匀制成0.2ml抗原乳剂注入EAM组小鼠颈部肌肉和皮下组织，1周后重复诱导1次;对照组用生理盐水取代兔肌肉匀浆加等量CFA混匀注射。发病动物症状体征分级标准见文献 ［4］ 。两组动物分别于免疫后22天或濒死前，用3%异戊巴比妥钠0.2ml注入小鼠腹腔，麻醉后用无菌注射器于心脏采血，肝素抗凝，同时取脾脏备检。另取大腿肌肉置于10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片做HE染色，行光镜检查。 1.2.2 外周血和脾淋巴细胞B7-1、B7-2蛋白表达 外周血淋巴细胞分离方法见文献 ［5］。脾脏经200目钢网过筛，用Ficoll液分离淋巴细胞，Hank’s液洗2次，重悬于含10%小牛血清的1640培养液中备用。淋巴细胞分为细胞因子处理组和未处理组，分别置于96孔细胞培养板中，在37℃、5%CO 2 中孵育72h。内加5μg/ml ConA诱导，培养基中含45%DMEM、10%FCS、10mM HEPES