生产生物农药的海洋微生物的筛选论文.doc

中文摘要 采用化学药物防治水产动物病害诱导病原菌株产生的耐药性，以及药物的残 留问题，已经逐渐引起人们的关注。用生物农药替代化学药物是解决该问题的有 效措施之一。本文以浙江沿海的微生物为研究对象，对其胞外酶活性、抑菌以及 杀虫活性进行研究，并以这三种活性为指标建立筛选具生物农药活性的菌株的模 型，以期为生物农药的研法提供科学依据。 在 2002 年 8 月-12 月间共采集细菌 2314 株，放线菌和霉菌 50 株。对采集的 细菌进行自然、高温（50℃）、酸性（pH4.5）、高盐（55‰）四种条件下的处理， 对淀粉酶等四种胞外酶活性进行分析，观察采样时间和培养条件对它的影响并从 中筛选出具有强酶活的细菌。结果发现：在自然条件下，采样时间对细菌的胞外 酶活力有很大影响；在高温条件下四种酶的活性弱于自然条件，只有极少数几个 月强于自然条件；高盐条件下，酪蛋白酶受其影响较小，其他酶受其影响很大； 酸性条件下，胶原蛋白酶受其影响相对较小，其他酶受其影响很大。此外，通过 对四种酶比较发现，具有强酪蛋白酶和胶原蛋白酶活力的细菌比例明显高于具淀 粉酶的，而淀粉酶的略强于酯酶。故具有强酶活的细菌多在自然条件下筛选。 对采自不同时间的细菌的苯丙氨酸脱氨酶活性研究发现，随着时间的推移酶 活性呈现出逐渐降低的趋势，即夏季高、秋冬季低；此外它的变化趋势与环境中 的分子氨的含量呈一定的正相关关系，此酶活性过高会造成环境中氨量增加而破 坏环境，因此可以将苯丙氨酸脱氨酶作为一个筛选指标。 运用 SPSS 软件对四种酶进行聚类分析，发现不论外界条件如何变化胶原蛋 白酶和酪蛋白酶距离都较接近，而淀粉酶和酯酶一般位于聚类的外群。所以两种 蛋白酶可以任选一种，与淀粉酶和酯酶共同作为筛选酶的模型。但是由于以四种 酶为依据对细菌聚类分析时并不依据酶活性大小分类，所以不能作为筛选细菌的 I 模型。而在对溶血活性的研究中发现有 59 株细菌具有较强活性，所以将这 59 株 菌作为进行生物筛选的目的菌。 对海洋微生物的抑菌和杀虫活性研究发现，利用溶血活性筛选出的 59 株细菌 中有 48 株能抑制革兰氏阴性菌，其中有 19 株具有强活性；抑制阳性菌的相对较 少，只有 9 株；同时抑制阳性菌和阴性菌的有 6 株；12h 细菌杀虫率为 94.9%。而 在采集的 50 株放线菌和霉菌中有 38 株既能抑制阳性菌又能抑制阴性菌，其中有 5 株具有较强抑菌活性；杀虫率为 82%。因此，这些细菌的抑菌活性以及产酶能 力均低于放线菌和霉菌，但杀虫活性较高。所以，海洋细菌的溶血活性可以作为 大批量筛选生物农药的初筛模型。 II Abstract Nowadays, much attention have been paid to the problems of drug tolerance of pathogenic bacteria of aquatic animals, and the persistent pesticide. The optimal solution to the puzzle is the utilization of biopesticide instead of chemical drug. In order to accomplish the objective, the extracellular enzyme, bacteriostasis and disinsection activities that produced by microorganism in Zhejiang coast were studied as the mark to set up selecting models of microorganism with ability to produce biopesticide. The models offered basic information to the research and exploitation of biopescitide. From August to December in 2002, total of 2314 strains of bacteria and 50 strains of actinomycetes and molds had been separated from seawater and seamud. Extracellular enzymes of bacteria were analyzed in natural, high temperature (50℃) , acid (pH=4.5) and high salinity (55‰) conditions in tu