TAA1蛋白翻译后修饰机制研究.pdfVIP

摘要 摘要 avoidance 避荫综合症SAS(shadesyndrome)是喜阳植物响应“光”这一环 境信号的改变，为了获得充足的光能而诱导的一系列形态及生理变化的适应机 制。其中，快速的伸长生长是这一反应最显著的症状。高密度种植的农作物会 产生避荫综合症。避荫反应会导致营养组分向快速伸长的器官(如茎和叶柄) 转移，减少在其它组织和器官(如叶片，花，果实和储藏器官)的分配，从而 降低作物的产量。研究避荫反应的机制，有效地减弱它对各种作物产生的不利 影响，成为推动这一研究领域发展的动力。色氨酸转氨酶TAAl催化由L．色氨 酸(L．Trp)形成吲哚．3．丙酮酸(IPA)，进而合成生长素吲哚乙酸(IAA)， 是参与避荫诱导IAA的快速合成的关键性基因，在避荫条件下，TAAI突变体， say3，无法正常诱导包括伸长生长在内的部分避荫反应。然而，目前我们并不了 解遮荫信号是如何调控TAAI的。本论文从蛋白质翻译后修饰水平，研究生长素 合成酶吖姨l的分子调控机制。 首先我们通过对TAAl蛋白的序列进行分析，对可能的磷酸化位点进行预 测。通过氨基酸序列的保守性分析，我们选择了可能被磷酸化修饰的第58位的 酪氨酸，60位的丝氨酸，93位的酪氨酸，138位的酪氨酸，159位的酪氨酸， 214位的苏氨酸，305位的苏氨酸进行定点突变并在细菌中表达纯化后，测定点 突变T从l蛋白的转氨酶活性。我们发现第60位，93位，214位，305位氨基 酸突变为甘氨酸后，TAAl的转氨酶活性没有显著变化，说明这几个位点的突变 不影响姨l活性，它们如果存在磷酸化修饰的话对TAAl的活性的影响可能 也不大。而第58位，138位，159位氨基酸突变为甘氨酸后Al的活性变的 很低，甚至没有活性。说明这几个氨基酸是保持T从l酶活所必需的，它们的 磷酸化程度的高低可能会显著影响TAAl的酶活性，有可能在TAAI的表达调 控中起调控作用。 RedANTI．FLAGM2 Gel 其次我们利用EZview beads亲和层析介质 Affinity 摘要 纯化TAAl-FL蛋白，并通过双向电泳进一步区分经修饰后具有不同等电点(pI) 的各吖蚺l蛋白点。最后对各点进行质谱鉴定，确定吖蚺l蛋白序列中第2l位 的丝氨酸和33位的苏氨酸存在磷酸化修饰。我们还发现PHYB缺失的突变体 pkyb9中的吖Al仅有一种等电点形式，且位置接近于C01．0中最酸端的点。因 此我们推测p砂69中的蚺1蛋白可能存在多个位点的磷酸化修饰。 关键词：避荫；TAAl；翻译后修饰 Abstract Abstract To their often toreductioninredto out-competecompetitors，sunplants respond far—red ratio，whichthe aseriesofshade light signalsvegetativeshade，byinitiating avoidance isthemost of responses．Rapidelongationgrowth prominentresponse shade avoidance Result of avoidance．Shade inreallocation responsestypically