头孢噻利对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药敏的研究.docVIP

头孢噻利对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药敏研究 朱穗京 (柳州医学高等专科学校附属卫校 广西 柳州545002） [摘要] 目的 观察双黄连和头孢噻利（Cefoselis，CFSL）伍用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin Rresistant Staphylococcus Aureus,MRSA)的抗菌活性及疗效。 方法 体外试验（琼脂稀释法、纸片扩散法、联合药敏试验、生长密度试验、胶乳凝集试验、电镜形态学观察）和体内试验（临床疗效观察）。 结果 CFSL（MIC:0.125～2μg/ml）对MRSA抗菌活性较高；双黄连可使CFSL的MIC下降；当CFSL为1μg/ml浓度，双黄连浓度在100～3200μg/ml之间时，随着双黄连浓度的增加，联合相对抑菌曲线呈线性上升；MRSA的PBP-2a胶乳凝集的量随药物浓度增加而减少；双黄连和CFSL伍用后，形态明显改变、细胞壁被破坏、部分MRSA细胞质溶解；临床疗效观察，两药伍用总有效率达96%。 结论 CFSL对MRSA抗菌活性较高。CFSL和高浓度的双黄连可破坏细菌细胞壁结构，具有较强的抗菌活性，两药联用则杀菌效果更好，有望成为临床上抗MRSA感染的较佳治疗方案。 [关键词] 头孢噻利，双黄连，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，配伍用药，抗菌活性 我国MRSA的感染率相当高，某些医院高达80%以上[1]，近几年仍有增高趋势系医院内感染的重要病原菌，是世界三大感染性疾病之一，严重威胁着人类的健康[2]。MRSA通过多种机制，对甲氧西林、等诸多抗生素产生不同程度的耐药[3]。CFSL对细菌的PBP3和PBP2都有极强的亲和力，抗菌活性强；能抑制细菌细胞壁合成过程中粘肽链的交叉连接，使细胞不能形成完整的细胞壁。对β-内酰胺酶稳定性好，使其不易诱导耐药株，从而维持其敏感性，较少引起细菌继发性耐药[4]，为治疗MRSA医院内感染提供了新的选择。MRSA感染与中医描述的热毒症十分吻合[5]，杨明炜等人初步研究结果表明20种清热解毒中药对MRSA有不同程度的抑制作用，根据“热者寒之”的原则应予清热解毒中药治疗[6]。从理论上讲中西药联合伍用可以关闭突变选择窗，但在临床上对于联合用药治疗MRSA的效果究竟如何还需进一步证实，所以本试验旨在比较观察单用双黄连、CFSL及两药伍用对MRSA的抗菌活性、抗菌机理及其治疗效果，为MRSA感染的临床治疗提供参考。 材料与方法 1.1材料： 苯唑西林（Oxacillin，OX）（重庆药友制药有限公司，批号:090904)；克林霉素、氯霉素、四环素、庆大霉素、利福平、左氧氟沙星、红霉素、万古霉素、利奈唑胺、头孢噻利等抗菌药敏纸片（杭州天和微生物试剂有限公司）； 硫酸头孢噻利注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号:091127）双黄连注射液(哈药集团中药二厂 批号：100106 )；青霉素结合蛋白(PBP-2a)胶乳凝集试剂盒(英国Oxoid公司，批号:18305)。MIT-P型多点接种仪（日本SAKUMA佐久间）；CN61M/721E型分光光度仪(北京东方德教育科技有限公司)；Walk Away-40型Microscan全自动细菌分析仪（美国德灵公司）；TM-1000台式电子显微镜（天美科技有限公司）。 2 方法 2.1 最低抑菌浓度(MIC)的测定 试验按照临床实验室标准研究所（Clinical and Laboratory- Standards Institute，CLSI）推荐的琼脂稀释法分别测定15株MRSA对CFSL等11种抗菌药物的MIC。判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC[7]。 2.3 抗菌药物敏感性试验（Kirby-Bauer test） 采用纸片扩散法（K-B法），采用NCCLS的推荐，用化学性质较稳定的OX代替甲氧西林检测MRSA。药敏纸片浓度含量依据《全国临床检验操作规程》第三版选择各测试药品药敏纸片规格；药敏结果判定标准按照NCCLS手册2005版判定，抑菌圈≤10mm为耐药(R)，≥13mm为敏感（S），11～12mm为中介(I)[8]。 2.4 联合药敏试验 采用琼脂稀释法，判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。 2.5 细菌生长密度(OD值)的测定 采用试管法，用分光光度仪选择Fixed Wavelength选项，在600nm波长处测定OD值。在比色杯中分别加入各样品：双黄连6400、3200、1600、800、600、400、100μg/ml；CFSL2、1、0.5、0.25μg/ml后将比色杯放入检测仓,读取各管OD值。 2.6 PBP-2a胶乳凝集试验 严格按照试剂盒操作说明进行， 分别设空白组、质控组、双黄连（6400、3200、1600 、80