复合诱变选育富铬酵母及其培养条件优化研究.pdf

摘 要 铬是生物体必需的微量元素，具有很多生物学功能。GTF(葡萄糖耐量因子)是 一种能维持动物血液中葡萄糖水平正常的物质，铬是保持GTF活性的必要成分。但 是无机铬的吸收率底、毒性大。酵母菌对微量元素具有很强的吸附作用，可以作为 微量元素良好的载体，将无机铬转化成有机铬，提高铬在机体内吸收利用率，降低 其毒副作用，且酵母本身含丰富的蛋白质和B族维生素，是一种良好的微生物蛋白 饲料营养源。所以，获得高产富铬酵母的关键就在于拥有一株好菌株。本实验就是 经N+注入并辅以紫外线复合诱变处理，筛选高产突变株，并确定制备富铬酵母的最 佳条件。 实验以热带假丝酵母(CmTdida X 参数是能量20Key，剂量0～202．6×10“N+／cm2，结合铬浓度剃度平板筛选法，得 到耐铬能力较强的菌株Y-6。结果显示：生物量和铬含量分别由原来的 培养，生产性能稳定。利用单因素试验摸索出了Y-6最佳培养条件：最佳培养基为： 1％酵母粉、1％蛋白陈、2％麦芽糖、蒸馏水配制，培养基含铬量800ug／mL、初始pH5．0、 10％接种量、培养温度30℃、培养24h，制备富铬酵母效果最佳，此项富铬酵母制 备技术为工业化生产奠定了基础。圹注入可能是一种有效的富铬酵母选育方法。 通过对N+注入酵母细胞的生物学效应研究发现：离子束对酵母细胞有直接刻蚀 损伤作用，菌体成活率随注入齐j量的增加呈先降、后升、再降的“马鞍型”变化关 系。SEM观察发现，未经N+注入的细胞较为完整、饱满且表面光滑，而经注入后 的细胞表面粗糙，可见明显的刻蚀损伤和破壁现象，并且注入剂量越大，伤痕也越 深宽。在培养过程中，经平板单菌落和显微镜观察，发现离子注入后的酵母菌落和 细胞形态与原始菌比较，均有明显的变化。 本实验对富铬酵母中有机和无机铬进行测定，发现筛选菌株Y一6有机铬含量达 94．6％，而出发菌的有机铬含量是85％。紫外光谱分析，高铬酵母在260 rim处有特 征吸收峰：用氨基酸自动分析仪对高铬酵母中的17种氨基酸含量进行分析，证实 富铬酵母中的氨基酸含量大多高于普通酵母，尤其是赖氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异 亮氨酸等人体必需氨基酸的含量明显提高 关键词：旷注入；富铬酵母；生物量：铬含量；诱变筛选；条件优化 Abstract Chromiumisa traceelementin withmuch necessary organismbeingprovided tolerance a ingredient natural function．GTF(glucosefactor)isrequired maintaining inanimalblood．But chromiumhavea1ittle and Ievel glucose inorganic absorptivity can it． callsorbtraceelement becomefavorablecarrierof greattoxicity．Y醣st greatly,so The cantransform chromiumto of itsassimilated yeast inorganic organicit，improving rateandreduce containmuch and itisfavorable toxicity．Yeastvery proteinVB，so