TRAIL诱导白血病细胞株K562、U937凋亡及其作用机制实验研究.pdfVIP

中文摘要中又摘要 及其作用机制的实验研究 摘 要 Necrosis 目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor factor．related apoptosis—inducing Necrosisfactor，TNF)超家族新成 ．．的肿瘤坏死因子(Tumor 员。TRAIL能快速、有效的诱导肿瘤细胞凋亡，而对大多数 组织细胞没有毒性。有关TRAIL对血液系统肿瘤作用的研 究报道不多见。本研究我们以正常人胚肺成纤维细胞株 7、K562的促凋 ．(daunorubicin，DNR)对白血病细胞株U93 亡作用，在mRNA’水平分析化疗药作用后其两种TRAIL死 亡受体DR4、DR5(death4、5)和两种TRAIL诱骗 receptor 1、2)表达的变化，探讨 受体DcRl、DcR2(decoyreceptor TRAIL单独及联合化疗治疗急性白血病的可能性及其机理。 为TRAIL作为一种新型的肿瘤治疗生物制剂治疗血液系统 肿瘤提供理论依据。 方法： 1 单独使用TRAIL对U937细胞的诱导凋亡作用 1．1倒置显微镜下观察浓度为1 TRAIL孵育24小时 gg／ml U937细胞的形态变化。 1．2 TRAIL中孵 AO—EB荧光染色法。将U937细胞在5 1ag／ml 育2小时，收集细胞，用lAO／EB染液混匀，放置盖 pl 玻片，荧光显微镜下观察。 中文摘要 1．3 涂片，采用细胞凋亡检测试剂盒，按说明书操作，观察 凋亡形态，并计算凋亡指数(TU怔L阳性细胞所占的百 分比)。 合作用时对K562、U937细胞的生长抑制率。 3 用酶联免疫吸附试验法(enzyme—linked 一效-时一效关系。 4 reverse chain transcriptionpolymerase 小时后TRAIL死亡受体和诱骗受体表达变化，分析 TRAIL治疗效果和与化疗协同作用的机理。 结果： 1 倒置显微镜下观察到TRAIL作用下的U937细胞出现体 积变小、变形、细胞膜发泡等凋亡现象。收集一定浓度 色法荧光显微镜下观察到典型的早期及晚期凋亡的细胞 形态学改变；细胞涂片的TUNEL染色可以在显微镜下 见到大量棕黄色的凋亡细胞，计算凋亡指数为18．3673～ 63．1579％。 2 MTT分析细胞增殖抑制率显示，单用TRAIL对K562、 U937细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性；而TRAIL对 正常细胞株MRC．5的存活率有轻度影响，无剂量依赖 中文摘要 疗药物的联合作用是否具有协同性，结果显示K562细 胞在两药不同浓度联用后Q值介于单纯相加与增强乃至 085～1．24)；。而 联用后Q值介于单纯相加与增强之间(0 MRC一5细胞在两药不同浓度联用后Q值介于拮抗与单纯 相加之间(0．59～1．O 在杀伤K5