红肉桃果肉cDNA文库构建及花青苷合成关键基因鉴定.pdfVIP

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2017-09-06 发布于安徽
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红肉桃果肉cDNA文库构建及花青苷合成关键基因鉴定.pdf

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目录中文摘要……………………………………………………………………………………………。I Abstract………………………………………………………………………．………………………………………………．III 缩略词(Abbreviations)…………………………………………………………………………。V 前言………………………………………………………………………………………………………………………………1 l cDNA文库构建…………………………………………………………………………………1 1．1cDNA文库构建的方法………………………………………………………………………．2 1．2cDNA文库的种类……………………………………………………………………………．2 1．3cDNA文库的应用……………………………………………………………………………．3 2花青苷研究现状………………………………………………………………………………．．4 2．1花青苷的生物合成途径………………………………………………………………………5 2．2花青苷合成的结构基因及表达………………………………………………………………6 2．3花青苷合成的调节基因及表达………………………………………………………………8 3本研究的目的意义和思路……………………………………………………………………1l 第一部分红肉桃果肉cDNA文库的构建……………………………………………………．．13 1材料与方法……………………………………………………………………………………13 1．1试验材料……………………………………………………………………………………．．13 3 1．2试验试剂……………………………………………………………………………………一1 1．3主要仪器设备………………………………………………………………………………．14 1．4试验方法……………………………………………………………………………………．15 1．4．1总RNA的提取……………………………………………………………………………15 1．4．2 mRNA的分离与纯化………………………………………………………………………15 1．4．3cDNA第一链合成…………………………………………………………………………15 1．4．4 cDNA第二链合成…………………………………………………………………………15 1．4．5蛋白酶K消化及Sfi酶切…………………………………………………………………15 1．4．6 cDNA片段筛选……………………………………………………………………………15 1．4．7 5 cDNA与载体的连接及纯化………………………………………………………………．1 1．4．8重组质粒电转化反应……………………………………………………………………．．20 1．4．9文库滴度测定……………………………………………………………………………一20 1．4．10文库扩增保存……………………………………………………………………………20 1．4．1 1文库克隆重组率和插入片段长度检测…………………………………………………．20 2结果与分析……………………………………………………………………………………20 2．1总RNA质量检测……………………………………………………………………………20 2．2mRNA的分离………………………………………………………………………………～23 2．3双链cDNA合成和分级……………………………………………………………………．23 2．4文库质量评价…………………………………………．……………………………………24 3讨论…………………………………………………………………………………………………………………………．．26 第二部分红肉桃果肉花青苷生物合成关键基因鉴定………………………………………。28 1材料与方法……………………………………………………………………………………28 1．1试验材料……………………………………………………………………………………．28 1．2试验试剂……………………………………………………………………