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摘要
hirsutum
棉花(GossypiumL．)GhNAPI-LC3基因是在本实验室前期工作中克隆到的，其氮基酸
残基完全匹配，因此推测其为棉花中的微管结合蛋白基因。
hirsutum
L)为材料，应用实时定量PCR技术分析了
本研究以陆地棉石远321(Gossypium
Gh／#API-LC3基因的表达特点并制备了能够专一识别MAPl一LC3蛋白的抗血清。主要结果如下：
1．采用CTAB．PVP法提取棉花各组织KNA，得到纯度高、完整性好的RNA。
2．利用实时定量PCR技术比较了GhMAPI-LC3基因在棉花各组织中的表达情况，在下胚轴、
一3DPA胚珠、30DPA纤维与35DPA纤维中没有检测到该基因的表达，在胚搬、叶片、花瓣、花
到了GhMAPI-LC3基因的表达，其中以20DPA纤维中的表达量最高．
3．采用CTAB-PVP法提取棉花叶片基因组DNA，并应用基因特异性引物对其进行PCR扩增。
基因组DNA的扩增产物与20DPA纤维cDNA的扩增产物大小相同，表明该基因不吉内含子．
4．将该基因的开放读码框克隆至pET30a表达载体中．导入大肠杆菌JMl09(I)E3)菌株中诱
导表达，得到占菌体总蛋白2％的目的蛋白表达量。
5．应用亲和柱层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳回收技术纯化得到目的蛋白。
6．以纯化的蛋白免疫小鼠，得到抗血清，经Western
blotting检测，可以专一识别MAPl-I．123
蛋白。
关键词：棉纤维，微管结台蛋自，实时定量PCR，原核表达
Abstract
hirsutum wascloned
inour
Cotton(GossypiumL)GhMAPl-LC39ene
laboratorypreviously．Amino
acid ofthe isidentictotheconservationof
sequence gene the chain
region light 3(LC3)of
microtubule—associated itseemsthe isthe
protein
JA(MAPlA)and1B(MAPlB)．Sogene counterpart
ofMAP／一LC3incotton．
gene
The characteristic
expression ofGhNAPI-LC3in hirsutum．L、was
geneShiyuan321(Gossypium
real-time antiserum
MAPl一LC3was
analyzedby quantitativePCR(RQ—PC酌andagainst prepared．The
resultswereasfollows：
1．The
CTAB·PVPmethodwas toextractRNAofcottontissuesand RNA
adopted highquality
wasobtained．
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