龙葵金属硫蛋白基因克隆及其功能分析.pdf

Ⅲ…r …2洲3Ⅲ3哪2洲2Ⅲ2㈣6 目录 摘要…………………………………………………………………………………………………………l Abstract………………………………………………………………………………………………………………………………………．3 英文缩写词表………………………………………………………………………………………………．5 前言…………………………………………………………………………………………………………．1 1综述…………………………………………………………………………………………………………………………………………．1 1．1Cd超积累植物及其耐受机理研究……………………………………………………………………．1 1．1．1 Cd超积累植物………………………………………………………………………………………一1 1．1．2植物对Cd的耐受研究………………………………………………………………………………1 1．2植物金属硫蛋白………………………………………………………………………………………一5 1．2．1金属硫蛋白的分类……………………………………………………………………………………5 1．2．2金属硫蛋白组成、结构和理化性质…………………………………………………………………6 1．2．3金属硫蛋白基因和金属硫蛋白的功能………………………………………………………………7 2目的和意义………………………………………………………………………………………………ll 试验材料和方法……………………………………………………………………………………………13 1试验材料…………………………………………………………………………………………………l3 1．1植物材料………………………………………………………………………………………………13 1．2质粒和菌株……………………………………………………………………………………………l3 10主要工具酶及试剂……………………………………………………………………………………13 1．4试验仪器………………………………………………………………………………………………15 1．5所用溶液及其配制……………………………………………………………………………………15 2试验方法…………………………………………………………………………………………………16 2．1龙葵MTeDNA克隆…………………………………………………………………………………．16 2．1．1引物设计……………………………………………………………………………………………．16 2．1_3 eDNA单链的合成……………………………………………………………………………………17 2．1．4 RT-PCR扩增…………………………………………………………………………………………l8 2．1．5 PCR产物与T-载体的连接…………………………………………………………………………18 青岛农业大学硕士学位论文 目录 2．1．6重组质粒的转化……………………………………………………………………………………．18 2．1．7菌液PCR鉴定阳性克隆……………………………………………………………………………19 2．1．8测序…………………………………………………………………………………………………………………………………．．19 2．2 SorMT2a的生物信息学分析…………………………………………………………………………19 2．2．1序列的提交及氨基酸序列比对……………………………………………………………………．19 2．2．2 SorMT2a核苷酸序列分析…………………………………………………………………………．20 2．2．4系统发育分析………………………………………………………………………………………．20 2．3转龙葵MT2烟草及Cd耐受性分析…………………………………………………………………2l 结果与分析…………………………………………………………………………………………………28 1龙葵MTcDNA克隆……………………………………………………………………………………．28 1．1龙葵Tota