血脑屏障通透性改变的TNF-α损伤机制及清开灵的保护作用.pdfVIP

中且=摘要 中文摘要 脑病发生机制是现代医学研究的热点之一。其中，脑缺血后的炎症过程已经成为研 brain 究的重要领域，而血脑屏障(blood 于脑缺血后的级联损伤发生了重要影响。中医药治疗多种脑源性疾病具有较好的疗效， 特别是对于脑缺血损伤的治疗作用，具有显著的临床优势。本文以脑缺血．再灌注损伤 抗体阻断大鼠血循环中的TNF—a，分析脑缺血一再灌注损伤血脑屏障功能及通透性的改 变，探讨脑缺血．再灌注损伤的炎性机制。 本论文由文献综述和实验研究两部分组成。 文献综述主要分析了脑缺血．再灌注损伤血脑屏障通透性现代机制研究的状况，重 点阐述了与炎症反应相关的诸多细胞因子在脑缺血一再灌注损伤中的作用，以及血脑屏 障在该病理过程中的形态与功能变化，为本实验设计提供了思路与方法。 实验研究部分为血脑屏障通透性改变的TNF．n损伤机制及清开灵的保护作用研究， 包括三方面的内容： 第一部分主要探讨阻断TNF．n后脑缺血一再灌注损伤血脑屏障通透性变化的特征及 清开灵的保护作用。选用健康雄性Wistar大鼠，利用双侧颈总动脉夹闭的方法复制大鼠 前脑缺血一再灌注模型，分别给予清开灵注射液、TNF一旺抗体及该抗体与清开灵共用。 选择再灌注24h和72h两个时间点，检测脑组织含水量、组织Ⅳ型水通道蛋白 注BBB损伤的水液平衡变化病理过程中TNF一Ⅱ的作用，及清开灵解毒通络作用对此病 理过程的影响。 第二部分探讨了阻断TNF—a后脑缺血．再灌注损伤血脑屏障相关细胞因子表达的变 化，及清开灵对这些因子变化的影响。造模方法和动物分组同第一部分。检测血清 细胞因子变化的调节机制，以及清开灵的作用特征。 第三部分观察阻断TNF—a后脑缺血．再灌注损伤血脑屏障组织病理学特征变化及清 开灵的作用。造模方法和动物分组同第一部分。采用石蜡切片HE染色光镜观察脑微血 管的形态改变，以期揭示TNF．旺是否在脑缺血．再灌注血脑屏障形态学损伤中发挥作用， 并探讨清开灵对这种形态学影响的特征。 实验研究结果： 一、阻断TNF-a及应用清开灵可￡l减轻畸缺血辱耩驻脑组织水肿程度 1．阻断TNl7-a及应用清开灵可以阻抑啮组织含水量的升高 大鼠脑缺血再灌24h时，清开灵可降低脑组织含水量来减轻脑水肿，发挥脑保护作 用。72h时，清开灵的这种作用仍较显著。而阻断病理过程中n师．旺的作用也显示了优 良的阻止脑组织含水量增加的作用，基本保持了正常脑组织含水量的水平，显示TNF- o在脑缺血．再灌注的BBB损伤机制中扮演了重要角色。 血脑屏障通透性改变的TNF-a损伤机制及清开灵的保护作用 2．阻断TNF-n及应用清开灵可以船羞Ⅳ型水通道蛋白恢复表达 脑缺血再灌24h和72h时，清开灵可使脑组织AQP4不同程度恢复表达，起到了恢复 AQP4功能的作用，从而间接地保护了血脑屏障，维持了大脑水平衡，且随着时间延长 而增强，但这种效应以阻断TNF一旺更显著。表明TNF—a参与了该病理损伤过程，而清开 灵的脑保护作用途径并非经单一拮抗TNF—Ct起作用。 3．阻断TNF-n及应用清开灵可以减轻血管内源性白蛋白渗漏 清开灵在24h和72h均可减轻脑组织微血管外内源性白蛋白的表达，即减轻了血脑屏 障的损伤，内源性白蛋白向血管外渗漏减少。阻断TNF-a更为明显的改善了内源性白蛋 白漏出血管外的情况，TNF一Ⅱ阻断后清开灵的疗效更为显著。说明清开灵降低受损BBB 通透性的作用与拮抗TNF．Ⅱ损伤有关，但还有其他作用途径。 二、阻断1NF-q及应用清开灵对脑缺血辛掰翻书拶钭日关细胞因子表达的影响 1．阳断INF-d及】立用清开灵对脑缺血-再灌注后血清TNF—Q含量的影响 脑缺血一再灌注后，血清TNF．o含量明显升高。再灌注24h和72h，清开灵不能明显 于应用抗体各组，而缺血一再灌注72h，情况出现翻转，应用TNF-a抗体各组血清TNF— a明显降低。说明，TNF—a单克隆抗体的作用并不是即时效应，而是随着时间延长而作 用增强。但是，即时应用抗体，清开灵也未体现出降低血清TNF．n的作用。说明清开灵 对脑缺血一再灌注损伤血脑屏障的保护机制并不是通过调节血中TNF—a的浓度来实现 的。 2．阻断TNF-n及应甩清开灵对脑缺血．再灌注后血清slCAM。1含量的影响