兔肾缺血-再灌注损伤后叶间动脉血流动力学变化与肾小管上皮Bcl-2表达的相关性.pdfVIP

中国医学影像学杂志 ChineseJournalofMedicalImaging ·213· 超声医学 UltrasoundImaging 肾脏作为高灌注器官，极易发生肾缺血 ．再灌注 1．2 实验方法 损伤 (ischemicreperfusioninjury,IRI)。IRI对 肾脏 的 1．2．1 观察指标 运用 CDFI显示肾动脉血流信号，各 功能和组织结构均可造成明显损伤，可引起 肾脏细胞 亚组均于术后2h、8h、24h运用PW取样容积于肾椎体 凋亡，肾实质细胞丧失、细胞数 目减少，引起血管收缩， 两侧缘叶间动脉获取3个以上稳定一致的血流频谱，选 降低 肾脏血供，导致肾功能急剧下降。目前临床上对 用高频线阵探头，探头使用中心频率为 10．0MHz，调整 于肾IRI的研究多见于血清生物化学、分子生物学及 仪器设置，总增益为 100，深度为5cm，量程为0～60cms／， 病理学检测。彩色多普勒超声作为一种实时、无创性 声束与血流方向夹角60。，连续测量3次肾叶间动脉 检查手段，能客观动态地显示肾皮质血流灌注情况， 血流动力学参数，取平均值，并保存 图像。肾叶间动 从而提示 。肾缺血 ．再灌注后肾损伤的存在。细胞凋亡 脉血流动力学参数测定指标采用描记多普勒波形、仪 (apoptosis)是缺血 ．再灌注组织和器官损伤的途径之 器 自动分析测量收缩期峰值流速 (V )、舒张末期流 一 l【】 ， 而bc1．2是体内重要的抗凋亡基因，肾缺血 ．再 速 (Vd)、时间平均峰值流速 (Tam)、搏动指数 (PI) 灌注后在远端肾小管高度表达保护肾功能 2【】，测定肾 和阻力指数 (RI)，PI及RI按下式计算：PI= (V 。一 小管上皮中Bc1．2蛋白的表达可 以了解肾损伤的程度， Vd)／Ta… ；RI= (V 一Vd)V／ 。为减少因手法 判断预后。本研究通过建立兔肾缺血．再灌注损伤模型， 不同而产生的测量差异，均 由同一人在相同的测量部 运用彩色多普勒血流显像 (CDFI)及脉冲多普勒 (Pw) 位操作。 技术检测肾叶间动脉血流动力学改变，并检测肾小管 1．2．2 标本采集 完成左肾动脉血流动力学测量后， 上皮Bc1．2蛋白表达情况，分析两者间动态变化的关系， 根据分组情况在不同时间点处死动物，在低温条件下 从而评价彩色多普勒超声对兔肾缺血一再灌注损伤程 开腹切除左肾，取部分左肾皮质组织以10％甲醛固定， 度的检测价值。 待测。肾组织经脱水、透明、浸蜡和包埋，常规切片 (3gm)。一张作HE染色，制片显微镜观察病理变化情 况，分析肾小管损伤程度；另一张作免疫组化。 1．1 实验材料 1．2-3 免疫组化 SABC法测定肾小管中Bc1．2蛋 白表 1．1．1 兔肾缺血 一再灌注损伤模型制备 健康成年 日 达 ①免疫组化法染色：严格按照Bc1．2试剂盒说明操 本大 白兔48只 (由泸州医学院实验动物中心提供)， 作。②结果判断：400倍光镜下观察，照像。胞质内或 雌雄不限，体重 1．8～2．4kg，平均 (2．1±0．2)kg。经 细胞膜呈棕黄色染色为阳性，不着色为阴性。每张切 耳缘静脉注射2％戊巴比妥钠 1．5ml／kg(中国医药集团 片随机选取 10个视野，采用ImagePlusPro6．0图像分 上海化学试剂公司)麻醉，兔取仰卧位固定于手术台上， 析软件进行分析，计算阳性细胞的平均光密度值。 上腹部备皮，行正中切口，约 5cm，沿腹白线逐层分离， 1_3 统计学方法 采用SPSS10．0软件分析，数据以 剪开腹膜，用湿纱布拨开肠管，暴露肾脏，切除右肾， ± 表示，组间、组 内比较采用 t检验；肾叶间动脉 以玻璃针小心分离左肾动、静脉，保护输尿管，用无 V Vd、 PI、RJ与 肾组织Bcl