呼吸道合胞病毒TaqMan探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用.pdfVIP

生 技 术 通 讯 … ． LEITERSINBIOTECHN0L0GY V012·3Nlo。．2·w～Jar．·，，2012 211 ，rr doi：10．3969~．issn．1009-0002．2012．02．016 研究报告 呼吸道合胞病毒TaqMan探针实时定量RT—PCR检测方法 的建立及应用 郑文芝 ，张骞 ，魏建 民 ，薛鹏浩 ，王翔 ，赵智慧 ，郑丽舒 1．内蒙古农业大学 生命科学学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2．中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所。北 京 100052 [摘要】 目的：建立呼吸道合胞病毒(RSV)核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，并对临 床样本进行检测。方法：比对编码RSV非编码蛋 白的基因序列，选取其保守片段设计引物和探针，建立实时荧光定 量RT—PCR检测方法，并与传统RT—PCR方法进行 比较 ，分别对两者 的灵敏性、特异性、重复性及临床样本检验 的适 用性进行评价。结果：所建立 的实时荧光定量RT—PCR检测方法可用于RSV的特异性检测。相对于传统RT—PCR方 法100拷贝，反应 的检测灵敏度 ，实时荧光定量RT—PCR的检测灵敏度达到10拷贝／反应 ，检测范围为10一l0拷‘贝／反 应，且具有 良好的特异性和重复性。从169份临床呼吸道标本中检出RSV阳性40例，高于普通PCR方法(31／169)。 结论 ：建立 了RSV的TaqMan探针实时定量PCR检测方法，并可用于临床鼻咽拭子样本 的检测 ，在临床上具有较好 的 应用前景。 【关键词] 呼吸道合胞病毒；TaqMan探针；实时定量RT—PCR [中图分类号] Q78 [文献标识码] A [文章编号] 1009—0002(2012)02—0211-04 Developmentand Application ofTaqM an ProbeReal-TimePCR As— say forDetection ofRespiratory SyncytialVirus ZHENGWen—Zhi，ZHANGQian~,WEIJian-Min，XUEPeng-Hao， WANGXianf，ZHAOZhi—Hui，ZHENGLi-Shu 1．College ofLife Sciences，InnerMongolia AgriculturalUniversity，Hohhot，0100181；2．NationalInstitute forVi· ralDiseaseControlandPrevention，ChinaCDC，Beijing100052；China 牛Correspondingauthor，E-maih zhenglishu2o00@sina．corn [Abstract] 0bjective：Todevelop aspecific，rapid，sensitiveTaqManbasedreal-timequantitativePCR assay ofrdetectionand quantitationofrespiratory syncytialvirus(RSV)．Methods：Thespecificprimersand fluores· cence-labeled probe were designed according to the conservative gene sequence ofRSV．Absolute viralcopy was achieved through the standard curve．Subsequently，experimentswere unde~aken to assess specificity，sensitivity and reproducibility，then compared with conventional PCR using clinic specimen．Results：Comparedwith conve