基于随机扩增多态DNA的序列特异性扩增标记法对乌苏里貉食毛症的分析.pdfVIP

ChineseJournalofVeterinaryMedicine 中国兽医杂志 2012年 (第 48卷)第 3期 41 基于随机扩增多态 DNA的序列特异性 扩增标记法对乌苏里貉食毛症的分析 魏 来，付 晶，杨春 山，白秀娟 (东北农业大学动物科技学院，黑龙江 哈尔滨 150030) 中图分类号：$858．92 文献标识码 ：B 文章编号：0529—6005(2012)03—0041—03 貉 (Nyctereutes)在动物分类上属食 肉 目(Car— 的引物对健康和 自咬样体基因组池进行扩增 。PCR nivora)，犬科 (Ca nidae)，貉属 (Nyctereutesgenus)，别 扩增总体积为 25 L，其 中灭菌水 16．3 L，10× 名貉子，是珍贵的毛皮动物。其皮是制做皮大衣、皮 Buffer(含镁离子)2．5 “L，dNTP(10mmol／L)2．0 领、皮帽的高级原料 。食毛症是笼养貉的常见病，该 L，随机引物 2．0 L，Taq酶 IU，DNA模板 100 病导致貉被毛粗乱，轻者造成针毛、底绒参差不齐 ，尾 ng。反应条件 ：94℃预变性 5rain；94℃变性 1rain， 根裸露；严重者皮肤外露，甚至出血、溃疡，给饲养户 4O℃退火 1rain，72℃延伸 1．5min，循环 45次 ； 造成经济损失 。然而该病 的发病机理和影响因素尚 72℃10rain，4℃保存 。产物经 296／琼脂糖凝胶电泳 不明确 ，彭毛_】认为食毛症是由于 日饲喂料中缺乏含 检测。并对 PCR产物进行克隆测序。 硫氨基酸 (胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨基酸)，FrankM 1．3 RAPD标记 向SCAR标记的转化 根据测序 。等认为 ，铁元素的缺乏会引起食毛症的发生。也 结果 ，使用 PrimerPremier5．0设计 出sCAR标记 有学者认为，周围环境和气候的骤然变化会引起食毛 的特异引物 ，反应体系总体积为 25 L，其 中灭菌水 症 的发生_3。本试验 以SCAR(sequnence-character 16．3 L，10×Buffer(含镁离子)2．5 L，dNTP(10 amplifiedregions)标记对貉子食毛症遗传学病因进行 mmol／L)2．0 L，随机 引物 2．0 L， g酶 IU， 探讨 ，为开展貉子抗病育种 的标记辅助选择奠定基 DNA模板 100ng。反应条件 ：94℃预变性 5min； 础。李玉梅 ]、马丽娜[5]、刘宗岳_6等将该方法也被 94℃变性 1min，43．9℃退火 1rain，72℃延伸 1．5 应用于水貂 自咬症的检测。 rain，循环 45次 ；72℃10min，4℃保存 。产物经 1 1 材料与方法 琼脂糖凝胶电泳检测 。 1．1 试验动物 黑龙江省大庆市泰安貉养殖基地 2 结果与分析 提供饲养条件和遗传背景均一致的乌苏里貉 87只， 2．1 引物的筛选及健康与食毛貉子 PCR电泳检测 健康貉子 56只，患食毛症貉子 31只，一2o℃冷冻保 在 160个随机引物中，筛选出15个扩增 良好且多 存 。 态性较好的引物 (图 1)，其 中，健康和食毛貉子基 因 1．2 随机引物的筛选 首先用 160个 引物分别对 组中，引物 B7分别扩增