慢性应激对大鼠行为及脑源性神经营养因子在前额叶表达的影响.pdfVIP

中文摘要 刖 置 抑郁症发病率逐年增加，对人类的健康和生命已构成威胁，并引起人们 的广泛的关注。研究发现应激性生活事件是抑郁症的明显促发因素，且抑 郁症患者大脑存在与慢性应激大鼠相似的整体形态的改变。而慢性应激动 物模型所表现出来的行为特征的改变、血浆皮质激素的变化与抑郁症病人 的表现极为相似，因此以应激制作抑郁症动物模型，其发病机理可能与人类 抑郁症更接近。 既往关于应激所致抑郁的机制大多集中在应激后HPA轴的反应以及 神经递质变化的研究和海马结构的损害。近来有研究表明前额叶(PFC)活 力降低可以导致“假性抑郁”，特点是缺乏感情或兴趣、缺乏目标相关性行 为，有多种任务执行缺陷。前额叶皮质在单相抑郁症(UD)或双相抑郁症 症(BD)中均起作用。应激(Stress)是指机体受到各种应激原的刺激时，出 现的以交感神经兴奋和下丘脑一垂体一肾上腺皮质(HPA)分泌增多为主 的一系列神经内分泌反应，以及由此引起的各种功能和代谢的改变。脑源 性神经营养因子(Brain—derivedfactor，BDNF)是神经营养素 neurotrophic 方式激发神经细胞上高亲和力信号传导通路而发挥其特殊的生物作用。 本研究参照文献，使大鼠连续三周处于应激状态，制作成应激模型，研 究模型鼠前额叶神经元细胞变化，揭示慢性应激、前额叶神经元细胞活性变 化和抑郁症之间的关系，探讨应激所致抑郁的机制，为临床预防和治疗抑郁 性疾病提供理论参考依据和新的手段。 材料和方法 一、实验材料 1．实验动物 验动物中心提供。 2．主要试剂 素过氧化物复合物)免疫组化试剂盒，DAB显色剂，以上试剂均购于Boster 公司。 3．主要实验仪器 YSD-4G型药理生理实验多用仪(安徽蚌埠医学院无线电二厂)；Meta Morph／Cool Snap＆／Ax70计算机图像分析系统。 二、实验方法 1．动物分组 大鼠适应环境一周后采用旷场分析法测定行为并称重。然后随机分为 对照组5只和实验组10只。 2．应激过程 实验组lO只大鼠，分笼喂养，每笼1只。实验第1～21天，接受各种不 同的应激：电击足底、冰水游泳、摇晃、夹尾、热应激、禁食、禁水。每天给予 1种刺激，每种刺激累计使用2～3次。 对照组5只大鼠，放入一笼中群养，实验第1～2l天，不给任何刺激。 3．灌注取材与切片 实验第22天杀死所有大鼠．无论实验组还是对照组大鼠于第22天处 死前再次测定行为并称重。每只大鼠用戊巴比妥钠行腹腔麻醉后，经左心 然后剥离脑，后固定48小时以上；梯度乙醇脱水，石蜡包埋后，行冠状切片。 4．免疫组化法检测BDNF蛋白 采用免疫组化ABC法检测切片中的BDNF蛋白。 5，图像分析 每只大鼠选取前额叶完好的切片1张，在计算机图像分析系统上分别 测量双侧前额叶内BDNF阳性细胞的平均光度值。 6．统计学处理 采用SPSSll．5统计软件对数据进行分析。 ·2· 实验结果 1．体重和开场行为评定 实验前实验组与对照组在体重和开场行为指标上无差异。2l天后，实 验组与对照组相比，体重明显下降、中央格停留时间延长、水平穿越格数减 少、直立次数减少、修饰次数减少、粪便粒数增多。 2．前额叶神经元细胞的光镜下表现 光镜下观察，正常对照组大鼠前额叶皮质中，BDNF阳性细胞表达较 强，细胞排列密集，着色深，被染成棕黄色，免疫阳性颗粒主要分布于胞桨和 细胞膜表面，有的有较长的突起。实验组大鼠前额叶皮质阳性细胞数量明 显减少，且多数细胞呈空泡状，胞桨着色很浅。其中以右侧区明显。 3．前额叶神经元中BDNF的表达 通过比较实验组和对照组BDNF表达的平均光密度，可以看出，在左右 PFC区正常组大鼠BDNF的光密度均高于实验组。正常大鼠左右PFC区 低于正常对照组(P0．O】)，但右PFC区显著，同应激后左PFC具有显著差 异。 讨