小麦抗寒相关基因克隆及序列特征分析的研究.pdfVIP

小麦抗寒相关基因克隆及序列特征分析的研究.pdf

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摘 要 低温伤害不仅会限制农作物的栽种范围,也会造成农作物减产。每年全世界因低 温冷害造成的农作物损失多达数千亿元, 研究并提高植物抗寒力具有重要的理论意义 和现实意义。为了阐明冷诱导基因与小麦幼苗抗寒性的关系,本文选取来自于全国各 个麦区及部分外引种质共 260份小麦资源, 进行了幼苗抗寒性鉴定及冷诱导基因 STS  检测。根据 NCBI 上公布的24个冷诱导基因的 mRNA序列,分别设计引物对 260份 材料进行扩增,结果表明: Wrab19 (登录号:AF139915)、Wcs19 (登录号:L13437) 、  Wrab17(登录号:AF255053)  三个冷诱导基因与小麦抗寒性有一定关联,主要结果如 下:  1.实验室抗寒性鉴定结果表明,260 个品种的抗寒性分布广泛,品种间差异极 显著,所有品种的抗寒性变幅为 0.0~1.0,表现出较为明显的表型差异。 2.利用所设引物对 Wrab19基因进行扩增时,表现出较好的多态性,260 份材料 中, 133 个品种扩增出两条带,长度分别为 690bp 和 1200bp;127 个品种扩增出一 条带,长度为 690bp。随机挑选 4 个抗寒性不同的品种进行测序,品种名称为Serra、  02Y151、宿  9908、CP93­18­1­1­1­5,其中前两个品种序列与目的序列基本一致,而 后两个品种序列在 222bp 处多出一段 33bp 的序列,推测可能是等位基因。  3.利用引物对 260份材料进行 wcs19基因检测,结果发现,该引物特异性较好, 但在品种间没有多态性,260份材料均检测出 wcs19基因。进一步的序列分析表明,  wcs19基因DNA序列含有一段 121­122bp的内含子, 且该内含子序列中包含一个SNP, 即,内含子序列+9bp 处 G碱基的插入和缺失,此内含子及内含子中的 SNP与幼苗抗 寒性的关系还需进一步研究确定。  4.利用所设引物对 wrab17 基因进行扩增时,引物扩增特异性较好,预计目标 片段 468bp,但实际扩增出 610bp 的片段,同时在品种间没有出现多态性,260 份材 料均检测出  wrab17  基因。随机选取两个抗寒性不同的品种进行测序,DH5037  和  DH6197,抗寒性分别为 0.86、0.57,测序结果表明,2 条序列都含有一段 142bp 的内 含子序列,并且品种 DH6197 的内含子边界序列发生突变,由G→T,这可能是导致其 抗寒性下降的主要原因。  5.其余 21 个基因对 260 份材料的检测结果发现,冷诱导基因普遍存在于小麦 中。 关键词:小麦,抗寒基因,序列分析 I  Abstract  Injury by low temperture not only restricts the plant range of crop, but also causes yield  reduction. the loss of crops caused by low temperature is up to hundreds of billions RMB  in  the world  every  year.Studying  and  improving the  cold  tolerance  of  plants  play  a  significant role in the theoretical and actual aspects. For clarify the relationship between  cold induced gene and cold resistance of wheat seedlings, in this research, we selected 260  cultivars from the different wheat growing zones in China and some of introduced varieties  to identify the seedlings cold resistance, and STS detection of cold­regulated gene. Based  on the mRN

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