人赖氨酸特异性去甲基化酶LSD1小分子抑制剂的发现.pdfVIP

  摘要 人赖氨酸特异性去甲基化酶（Human lysine specific demethylase1 ，LSD1 ）是 胺氧化酶家族成员，在黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin adenine dinucleotide ，FAD ） 的参与下, LSD1 可以特异去除组蛋白 H3 上第四位（H3K4 ）和第九位（H3K9 ） 赖氨酸残基上的二甲基和一甲基修饰。LSD1 还能去除其它一些非组蛋白底物上 的甲基化修饰，例如p53 和 DNMT1 等。LSD1 具有多种生物学功能，主要包括 促进肿瘤增殖、抑制能量代谢、促进脂肪合成、抑制脂解和调控细胞分化等。2014 年，EMA 批准第一个 LSD1 特异型抑制剂 ORY-1001 进行一期临床试验，用于 治疗急性髓系白血病。因此，LSD1 成为潜在的药物作用靶标。 我们从大肠杆菌表达系统中表达并纯化得到了 GST 融合表达的 LSD1 重组 蛋白，利用 Perkin Elmer 公司的 Lance 试剂盒成功建立并优化了 LSD1 活性检测 方法，建立了 LSD1 的高通量筛选（High throughput screening ，HTS ）模型。并 对国家化合物样品库和国家新药筛选中心化合物库中的 337563 个样品进行筛选， 得到 284 个抑制活性较好的化合物。其中 37 个样品 IC50 低于 0.5 μg/mL，抑制活 性最好的化合物为 WNN0649-F005 ，其抑制LSD1 的IC50 为 0.012 μg/mL，与进 入临床一期的化合物 ORY-1001 抑制 IC50 相当。 我们进一步利用MTS 方法检测了部分化合物对 THP-1、HL-60 和 RPMI 8226 三株肿瘤细胞株增殖抑制的情况和对胺氧化酶 MAOA 的选择性抑制活性，最终 发现化合物 WNN0649-F005 和 WNN0819-F004 对这三株细胞具有较好的增殖抑 制活性，同时部分 LSD1 化合物同样具有对 MAOA 抑制活性。 综上所述，我们通过建立 LSD1 的高通量筛选模型，筛选获得一批对 LSD1 活性抑制较好的化合物，并通过 MTS 方法验证了化合物抑制肿瘤细胞增殖的效 果。为进一步的化合物结构改造和抗肿瘤的药物发现打下了基础，具有重要的研 究价值和应用前景。 关键词：LSD1 ；高通量筛选；肿瘤；抑制剂; 非组蛋白底物 I   Abstract Human lysine specific demethylase1(LSD 1) belongs to the flavin adenine dinucleotide (FAD) dependent amine oxidase family of demethylases and can catalyses the demethylation of the mono- and dimethylated lysine residues of histones, in the presence of FAD, specifically at the H3K4 and H3K9 positions, as well as other proteins such as non-histone substrate P53 and DNMT1. LSD1 plays important roles in normal and malignant cells, such as cell growth, energy expenditure, adipogenesis, metabolic regulation, etc. And also , a novel LSD1 inhibitor ORY-1001 has been in first clinical t