MTA1%2cVEGF和E-cadherin在胸水乳腺癌细胞中的表达.pdfVIP

·中文论著摘要· 乳腺癌细胞中的表达 刖 吾 浸润、转移是恶性肿瘤的基本生物学特征，是导致恶性肿瘤患者死亡的关键因 associated 素。肿瘤转移相关基因(metastasisgenel，MTAI)是近年发现的与信号传 导及基因调节有关的肿瘤转移相关基因。在多种恶性肿瘤组织中MTAl过表达与 肿瘤的浸润转移密切相关。 VEGF血管内皮生长因子(VEGF)被认为是作用强，特异性高的调节血管生 成的基因表达产物。是一高度特异的血管内皮细胞有丝分裂原，是肿瘤新生血管 生成的重要调控因子，不仅参与肿瘤血管生成、 增殖，还直接与肿瘤浸润、 转移 有关。 E—cadherin基因位于人染色体16q22．1位点，是钙粘附家族中的一员，主要 分布于各种上皮细胞中，是介导细胞之间及细胞与细胞外基质粘附的主要分子之 一。当E．cadherin表达减弱或缺失时，细胞之间的粘附作用减弱，细胞较易分散， 向外周浸润生长，一旦条件合适即脱离原发灶转移。 近期的研究发现，MTAl在促进细胞侵袭转移中起着重要的作用，本研究采 用免疫细胞化学染色法检测MTAl蛋白，血管内皮生长因子VEGF，上皮型钙粘 蛋白E．Cad在乳腺癌胸水中的表达情况，并与两者的相关临床病理特点以及三者 之间的相关性进行分析，阐明其在乳腺癌侵袭转移方面的作用。 材料与方法 一、材料 (一)临床资料 收集2009年12月至201 1年2月中国医科大学附属第一医院门诊及病房有乳 腺癌病史的恶性胸水患者标本，优选以肿瘤细胞为主、炎性细胞较少的60例作为 研究对象(经细胞免疫化学及经组织学证实为乳腺癌细胞)以及相对应的原发灶 组织作为对照并且复发期从3-16年不等，另外20例良性胸水标本作为对照，共 计80例。 (二)细胞系 一种乳腺正常上皮细胞系MCF．10A和两种乳腺癌细胞系(MCF．7为低侵袭 低转移癌细胞系，MDA．MB．435s为高侵袭高转移癌细胞系)购自北京协和基地医 学院细胞中心。 (三)主要试剂 出羊抗人MTAl多克隆抗体购自美国santa公司，VEGF鼠抗人单克隆抗体购 自福州迈新生物技术开发公司，E—cadherin兔抗人单克隆抗体购自福州迈新生物技 术开发公司，DAB酶底物显色试剂盒和S-P超敏试剂盒均购自福州迈新生物技 术开发公司。 二、方法 (一)免疫细胞化学染色技术 (1：100)，E．ca(1：100)免疫细胞化学染色。切片常规脱蜡至水，高温进行抗原修复， 一抗44C孵育过夜，DAB显色，苏木素复染。用PBS代替一抗作为阴性对照，用 已知阳性乳腺癌切片做阳性对照。 blot技术 (二)Western 1：100，E—cadherin1：1000 1：100稀释，VEGF 5％脱脂奶粉封闭液封闭2h，一抗(MTAl 稀释)4。C过夜，X底片曝光，显影，定影后拍照，以pactin为内参，用凝胶成 像及分析系统(BiolmagingSystems，美国)分析蛋白各条带的灰度值，每组结果 2 均为相同条件重复3次。 三、统计学分析 应用SPSSl6．0统计软件进行数据处理：采用Z检验(不满条件时用Fisher 确切概率法)分析各组计数资料，采用Spearman等级相关分析MTAl蛋白与VEGF 及E．cadherin蛋白组化表达的关系，采用t检验分析WesternBlot图像灰度值，并 用LSD．t检验对各样本均数行两两比较，采用Pearson相关分析两指标Westernblot 结果的相关性，P0．05为差异有统计学意义。 结果 一、MTAl，VEGF,E．cadherin在胸水乳腺癌细胞中的表达 在60例胸水乳腺癌细胞中，MTAl阳性表达40例／60例(66．66％)定位于 阳性表达34例／60例(57．78％)主要定位于细胞膜。统计学分析显示，MTAl