被动吸烟致神经管缺陷的形态学观察及其发生机制的实验研究.pdfVIP

中文摘要 被动吸烟致神经管缺陷的形态学观察及 其发生机制的实验研究 硕士研究生：王 东 硕士生导师：于向民 王文青 摘要 目的：在已建立的被动吸烟致神经管缺陷的动物模型的基础上，用 光镜和电镜技术观察畸形胚胎发生过程的组织学改变，运用亲和细胞化 学技术探讨神经上皮及其基膜、脊索和神经管周围间充质细胞表面糖基 即凝集素受体的时空变化，研究被动吸烟致畸的可能的机理。 方法：将怀孕的金黄地鼠随机分为两组，吸烟组用烟熏的方法建立 被动吸烟的致畸模型，并与对照组一起分别在受精后第8天的12时和 18时、受精后第9天和受精后第10天的8时取材。用体视显微镜和扫 描电镜观察被动吸烟对胎鼠神经管发育的形态学影响；常规透射电镜标 本制备，半薄切片，经甲苯胺蓝染色，对被动吸烟后各组胚胎神经上皮 的固缩细胞和有丝分裂相进行计数；超薄切片经醋酸双氧铀及枸椽酸铅 染色，在透射电镜下观察被动吸烟对神经上皮细胞超微结构的影响；其 余标本制作成石蜡切片，用免疫组织化学的方法显示纤维粘连蛋白；用 刀豆凝集素和生物素标记的荆豆凝集素作为分子探针，作亲和细胞化学 染色，对神经上皮及其基膜、脊索和神经管周围间充质细胞的基质粘着 分子和相应糖基即凝集素受体进行定性、定位观察，并利用图像分析技 术进行定量分析。 结果：1、电镜观察结果显示：各被动吸烟组胚胎神经上皮细胞排列 不规则，细胞间隙增宽，游离面微绒毛短缩，有的微绒毛末端膨大，甚 至形成若干不规则的胞质突起；细胞质中出现许多空泡，线粒体膨胀， 嵴减少甚至消失，有的线粒体伸长；细胞核形态不规则，核周间隙局部 膨大，可见有形物质，核仁分裂，异染色质增多，也可见到细胞核固缩 或裂解；有的死亡细胞裂解形成多个凋亡小体，在其邻近的正常细胞质 内可见被吞噬的凋亡小体。2、固缩细胞和有丝分裂相计数结果显示：各 被动吸烟组神经上皮的固缩细胞数比相应的对照组高l倍多(PO．01)， 除了细胞损伤外，我们也发现有丝分裂相也高于相应的对照各组 中文摘要 (PO．01)。3、被动吸烟组胚胎表现出明显的发育迟缓。各吸烟组胚胎 均小于相应各对照组，受精后第10天，仍有部分胚胎的前、后神经孔没 有闭合。4、免疫组织化学和亲和细胞化学染色结果显示：吸烟组中各胎 龄组的纤维粘连蛋白着色均不同程度地比相应的对照组浅(PO．01)。吸 烟各组胚胎的大豆凝集素l乖日荆豆凝集素染色均比相应的对照各组胚胎着 色深(PO．01)。 ＼ 结论：1、被动吸烟可诱导神经上皮及其周围间充质细胞变性，死亡， 细胞数量减少，从而导致了神经管的形成和分化异常，使神经管延迟闭 合或不闭合，这是被动吸烟致神经管缺陷的一条重要的途径。2、尽管被 动吸烟能提高有丝分裂率，可以部分代偿神经上皮细胞的减少，但由于 香烟烟雾致细胞死亡和诱导有丝分裂有明显的区域选择性，提示两者有 不同的作用机制。3、被动吸烟导致神经管缺陷的另一个重要途径是使神 经上皮的纤维粘连蛋白减少，干扰这些神经上皮细胞及其周围间充质细 胞的增殖和迁移，使神经管不能正常形成。4、被动吸烟致神经管缺陷的 发生与细胞膜表面的甘露糖糖基和岩藻糖糖基改变密切相关。被动吸烟 可使神经上皮及其基膜和神经管周围的间充质细胞的相应糖基明显升 高，细胞间的粘着增强，从而干扰神经上皮的正常细胞增殖、粘着和迁 移过程，这也是引起神经管缺陷的主要原因之一。 关键词：神经管缺陷；香烟烟雾；纤维粘连蛋白；凝集素；金黄地 鼠 2 英文摘要 and The oftheMechanism Study Experimental