间-尼索地平静注给药犬体内药代动力学研究.pdf

中文 摘 要 间一尼索地平静注给药犬体内 药代动力学研究 摘 要 间一尼索地平 (m-Nisoldipine)为尼索地平 (Nisoldipine) 的同分异构体，同属二氢毗陡类钙拮抗剂，具有扩张心血管， 防治冠心病、高血压病和慢性充血性心力衰竭及心源性休克 等作用。目前尚处于临床前研究阶段，国内、外未见有关间 一尼索地平静注给药犬体内药代动力学研究的报道。 目的:建立毕格犬血浆内间一尼索地平的含量测定方法， 研究静脉注射给药后，间一尼索地平在毕格犬体内的药代动力 学规律。 方法:(1)血药浓度测定方法:采用RP-HPLC法测定 血浆中间一尼索地平的含量;色谱条件的优选:对检测波长、 流动相的组成、配比，流速及柱温等因素进行分析，确定最 佳色谱条件;选择最适内标物质。(2)血浆样品预处理:取 血浆LOml，加入适量内标，调整pH值后进行液一液萃取， 涡旋、离心，吹干提取液，甲醇溶解残渣，注入色谱仪，以 内标法定量。(3)方法的选择性:取间一尼索地平甲醇溶液， 内标对照品甲醇溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。取 毕格犬空白血样，外加间一尼索地平及内标的模拟样品以及真 实血浆样品各一份，经过血浆预处理后注入高效液相色谱 仪，一记录色谱图。(4)最低检测限:以信噪比S/N,3时的 间一尼索地平注入色谱仪量为最低检测限。(5)线性及线性范 中文 摘 要 围:取空白血浆数份，各加入间一尼索地平的系列浓度甲醇溶 液及一定量的内标液，处理后分别注入色谱仪测定，以间- 尼索地平与内标的峰面积比值为纵坐标，间一尼索地平含量为 横坐标，绘制标准曲线，经回归处理得标准曲线方程并确定 线性范围。(6)间一尼索地平绝对回收率:含低、中、高浓度 间一尼索地平的模拟样品各处理5份，注入色谱仪、记录峰面 积，计算与等量间一尼索地平标准液峰面积的比值。(7)内标 绝对回收率:取空白血浆5份，各加入200ng内标后，调整 pH值，进行液一液萃取、浓缩，注入色谱仪并记录峰面积， 计算与等量内标标准液峰面积的比值。(8)方法回收率:含 低、中、高浓度间一尼索地平的模拟样品加适量内标后各处理 5份，注入色谱仪、记录峰面积，计算两者峰面积比值，由 回归方程计算出血浆药物浓度，计算与理论浓度的比值。(9) 精密度实验:低、中、高浓度模拟样品各处理5份，于一日 内不同时间测定，计算日内精密度。另低、中、高浓度模拟 样品每天各制备1份，连续制备并测定三天，计算日间精密 度。(10)稳定性试验:处理模拟样品9份，冰箱一4C避光、 冷藏，分别于0,2,4,6,8h和1,3,5,7日测定。(11) 反复冻融试验:取6份空白血浆，各加入等量间一尼索地平及 内标，3份当即处理并测定，另外3份反复冷冻、自然解冻 三次之后同法处理并测定，比较两组差异。(12)血样保存 稳定性试验:取6份空白血浆，各加入等量间一尼索地平及内 标，其中3份当即处理并测定，其余3份于一40℃低温冰箱冷 冻、避光保存45天后同法处理并测定，比较两组差异。(13) 药代动力学试验:配制约0.5mg/ml的间一尼索地平注射液。 中文 摘 要 实验动物为健康、成年毕格犬18只，雌雄各半，体重IOkg 左右。随机分为低、中、高三个剂量组，每组6只。三个剂 量组分别以O.lmg/kg,0.2mg/kg,0.5mg/kg的剂量后肢缓慢 静脉注射给药，于注射完毕开始计时，分别于不同时间 (5, 10,15,20,30,60,120,180,360min)取静脉血3ml, 置5ml肝素钠抗凝管中，放置30min后离心，吸取上层血浆， 于一40℃低温冰箱冷冻、避光保存。之后操作同 “血浆样品预 处理”。血样测定过程中穿插测定质控样品。(14)药代动力 学参数的获得:各剂量组分别采用3p97药代动力学软件自 动拟合处理，以理论血药浓度值与试验测定值的相关系数 r 最大和AIC值最小为判断标准，选择最佳房室模型，该剂量 组内各动物均按选定模型处理，分别获得各自的药代参数。 结果:(1)色谱条件:Waters高效液相色谱仪(515泵， 486紫外检测器);Millennium2010色谱工作站