鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测.pdfVIP

第34卷 第 1期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．34．NO．1 2012 年 1月 ChineseJoumalofPreventiveVeterinaryMedicine Jan． 2012 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2012．01．05 鸭肠炎病毒 gL蛋 白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测 李 冰 ，李慧昕，王 钰 ，韩宗玺，邵昱昊，刘小丽，孔宪刚 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 禽传染病研究室 ／兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001) 摘 要 ：为研究鸭肠炎病毒 (DEV)gL蛋 白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程 中的表达情况，本研究以DEV Clone．03基 因组为模板 ，应用 PCR方法分别扩增得到截短的(gLt，181bp~711bp)和全长的 gL(1bp~711bp)两 个基 因片段。将 gLt基因片段克隆至pET一30a原核表达栽体，转化 E．coliBL21(DE3)，经 IPTG诱导表达并对表 达产物进行纯化复性，免疫BALB／c小鼠，制备 鼠抗 gL蛋 白多克隆抗体 。同时将全长gL基因克隆至真核表达载 体pcDNA3．1(+)，构建真核表达重组质粒 pcDNA．gL，转染293T细胞。采用获得的抗 蛋 白抗体检测DEV感染 CEF后及真核表达质粒 pcDNA—gL转染293T细胞后 gL蛋 白在不同时间点的表达情况。结果表 明，在 pcDNA—gL 转染 293T细胞后 12h应用westernblot方法能够检测到 gL蛋 白的表达，其表达量随着转染时间增加而增加 ；在 病毒感染CEF后 24h应用间接免疫荧光方法能够检测到 gL蛋 白少量的表达，westernblot方法在病毒感染CEF 48h后检测到gL蛋白的表达，其表达量随着病毒感染时间增加而增加。上述结果提示，编码 gL蛋白基因可能 是病毒复制的晚期表达基因。 关键词：鸭肠炎病毒；gL糖蛋 白；原核表达；真核表达 中图分类号 ：$852．61 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—0589(2012)01．0019-05 DetectionoftheduckenteritisvirusgLproteinexpressedin chickenembryofibroblast LIBing，LIHui—xin，W ANG Yu，HAN Zong—xi，SHAO Yu—hao，LIU Xiao-li，KONG Xian—gang (DivisionofAvianInfectiousDiseases，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute ChineseAcademyofAgficulturalSciences，Harbin150001，China) Abstract：TostudytheexpressionofgLproteininchichenembryofibroblast(CEF)infectedbyduckenteritisvirus(DEV)， thetnmcatedgL(gLt，181bp-711bp)andwholegL(1bp一711bp)genewereamplifiedbyPCRfromDEVgenome，respectively． ThegLtrfagmentwasclonedintopET一30aandtransformedintoE．coliBL21(DE3)．TherecombinantgLtproteinwasexpressed with1PTG inductionandpurifiedbyProBondMT Purification System．Thespecificantiserum againstgL wasproducedin mouse immunizedbythegLtprotein．While，thegLgenewasclon