疣粒野生稻半胱氨酸蛋白酶基因ME_省略_85的cDNA全长克隆及序列分析_陈良.docVIP

· ２２ · 网 络 出 版 时 间 ：０１４－０４－２５ 网 络 出 版 地 址 ：ｔｐ：／ｗｗｗ．ｎｋｉ．ｅｔｋｃｍｓｄｏｉ１０．６０６ｊ．ｓｓｎ．００４－１３８９．０１４．４．０４．ｔｍｌ 疣粒野生稻半胱氨酸蛋白酶基因 ＭＥ０８５ 的ｃＤＮＡ 全长克隆及序列分析 陈 　 良１，２，３，４，李 定 琴２，３，４，钟 巧 芳２，３，４，殷 富 有２，３，４， 付 　 坚２，３，４，罗 红 梅２，３，４，程 在 全２，３，４ （１．云 南 农 业 大 学 农 学 与 生 物 技 术 学 院 ，昆 明 　６５００００；２．云 南 省 农 业 科 学 院 生 物 技 术 与 种 质 资 源 研 究 所 ，昆 明 　６５００００； ３．云 南 省 农 业 生 物 技 术 重 点 实 验 室 ，昆 明 　６５００００ ；４．云 南 昆 明 农 业 部 西 南 作 物 资 源 与 新 种 质 创 制 重 点 实 验 室 ，昆 明 　６５００００） 摘 　要 　 为 了 发 掘 疣 粒 野 生 稻 抗 性 基 因 ，从 受 白 叶 枯 菌 诱 导 的 疣 粒 野 生 稻 叶 片 抑 制 差 减 文 库 （ＳＨ 文 库 ）中 选 择 抗 病 相 关 的 ＥＳＴ 序 列 ，运 用 ｃＤＮＡ 末 端 快 速 扩 增 法 （ＲＡＣＥ）获 得 一 个 基 因 全 长 ，命 名 为 ＭＥ０８５ 。 通 过 生 物 信 息 学 分 析 表 明 该 基 因 全 长１　７１ｂｐ，具 有 一 个７５０ｂｐ的 开 放 阅 读 框 ，编 码２４９ 个 氨 基 酸 ，其 理 论 等 电 点 为 ５．６，相 对 分 子 质 量 为 ２７　８０． ，存 在 一 个 明 显 的 半 胱 氨 酸 蛋 白 酶 结 构 域 。 推 测 该 基 因 是 一 个 半 胱 氨 酸 蛋 白酶基因 。 关键词 　 疣 粒 野 生 稻 ＲＡＣＥ；半 胱 氨 酸 蛋 白 酶 ；ＤＮＡ 克 隆 ；序 列 分 析 中图分类号 　Ｓ５１１． 　 　 　文献标志码 　Ａ　 　 　 　 　文章编号 　１００４－１３８９（０１４）４－００２２－０６ Ｃｌｏｎｉｎｇ　ｎｄ　ｅｑｕｅｎｃｅ　ｎａｌｙｓｓｏｎ　ｕｌｌｎｇｔｈ　ＤＮＡ　ｆ　ｙｓｅｎｅ Ｐｒｏｔｅａｓｅ　ｅｎｅＭＥ０８５ｆｒｏｍＯｒｙｚａ　ｅｙｅｒｉａｎａ ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， （ ．Ｃｏｌｅｇｅ　ｆ　ｇｒｏｎｏｍｙ　ｎｄ　ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｙｕｎｎａｎ　ｇｒｃｕｌｕｒａｌ　ｎｉｖｅｒｓｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５００００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ　ｅｒｍｐｌａｓｍ　ｅｓｏｕｒｃｅｓ ｎｓｔｔｕｔｅ，Ｙｕｎｎａｎ　ｃａｄｅｍｙ　ｆ　ｇｒｃｕｌｕｒａｌＳｃｅｎｃｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ 　６５００００，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｙｕｎｎａｎ　ｒｏｖｉｎｃａｌ　ｅｙ　ａｂ　ｆ　ｇｒｃｕｌｕｒａｌ ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ 　６５００００，Ｃｈｉｎａ；４．Ｋｅｙ　ａｂ　ｆ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ　ｒｏｐ　ｅｎｅ　ｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄ　ｅｒｍｐｌａｓｍ　ｎｎｏｖａｔｏｎ，Ｍｉｎｉｔｒｙ　ｆ　ｇｒｃｕｌｕｒｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５００００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｒａｃｔ　Ｉｎ　ｒｄｅｒｔ ｉｎｄｉｎｇ ｈｅ ｅｓｓｔａｎｃｅ　ｅｎｅｓ　ｆＯｒｙｚａ　ｅｙｅｒｉａｎａ，ｔｈｅ　ＳＴ　ｅｌａｔｅｄｔ　ｉｅａｓｅ ｅ－ ｓｓｔａｎｃｅ ｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ ｓｕｂｔｒａｃｔｏｎｃＤＮＡ　 ｂｒａｒｙｏｆＯｒｙｚａ　ｅｙｅｒｉａｎａ　ｎｄｕｃｅｄｂｙ　Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｒｉｓｐｖ．ｒｙｚａｅ．ＢａｓｅｄｏｎｔｈｅＥＳＴ，ｗｅｏｂｔａｉｎｅｄ　 ｆｕｌｌｅｎｇｔｈｏｆｃＤＮＡ ａｎｄｎａｍｅｄ　 Ｅ０８５　ｙ ｒａｐｉｄｌｙ　ｍｐｌｆｃａｔｏｎ　ＤＮＡ　ｎｄｓ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｃａｎａｌｙｓｓｓｈｏｗｅｄ ｈｅ　ｅｎｅ ｅｑｕｅｎｃｅ　ａｓ１　７１ｂｐ ｎｃｕ－ ｄｉｎｇ　５０ｂｐ　ｆｏｐｅｎ　ｅａｄｉｎｇ ｒａｍｅ ＯＲＦ）ｗｈｉｈ　ｎｃｏｄｉｎｇ　 ｐｒｏｔｅｎ　ｆ２４９ａｍｉｎｏ　ｃｄｓ　ｉｈ　　ｒｅｄｉｔｅｄ ｒｅｌａｔｖｅ　ｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｓｓｏ ２７　８０． ａｎｄ　　ｙｐｏｔｈｅｔｃａｌｐ （ｓｏｅｌｅｃｔｒｃ　ｏｉｎｔ）ｏｆ５．６．Ｍｅａｎｗｈｉｅ，ｔｈｅｒｅ ｉ　ｎ　ｂｖｉｏｕｓ　ｏｍａｎ　ｆ　ｙｓｔｅｎｅ　ｒｏｔｅａ