重组可溶性人干扰素-γ工程菌培养条件的优化.pdf

摘要 摘要 一种广谱抗病毒糖蛋白。人干扰素吖由于其具有抗病毒、抗肿瘤、控制细胞凋亡 的活性，且对细胞来说有严格的选择性，常被用于临床研究及实践中。现有5种 疾病被美国FDA批准可用IFN进行临床治疗，即毛细胞白血病、慢性肉芽肿病、 与AIDS相关的卡波肉瘤、丙型肝炎和尖锐湿疣。正是由于IFN-7的高度生物活性， 其制备和应用受到人们的广泛关注与重视。随着对干扰素生物活性和临床应用的 研究不断深入以及DNA重组技术的应用，使大规模生产干扰素成为现实，并 为日益广泛的临床应用提供了可能性。目前生产IFN吖的方法主要是利用基因工 程方法大量生产，其中以利用大肠杆菌生产IFN吖最为常见。但是，由于大肠杆 菌表达外源基因的过程中会遇到很多困难，致使表达效率不高而使所表达蛋白质 多为包涵体。其中，以干扰素类蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式表达最为常见。 为获得有活性的重组蛋白，需将包涵体进行洗涤、溶解以及不同浓度的尿素梯度 复性，过柱纯化才能得到，生产周期和成本大大增加。为缩短生产周期、降低生 产成本，获得分泌表达的可溶性重组人干扰素吖显得尤为重要。本文就重组可溶 性人干扰素吖工程菌的生产条件进行了优化，·并最终获得了有生物活性的人干扰 素吖蛋白，为工业上低成本生产干扰素蛋白提供了理论及实验基础。具体实验结 果如下： 构建出重组载体pGEX．4T．1／hIFN吖及SUMO／hIFN-7。 2、以上重组载体克隆至E．coli 蛋白占总融合蛋白的50％左右。 3、通过对工程菌的培养时间、诱导温度、诱导剂的浓度及种类等条件的优化， 为0．2mM诱导8h，培养基中加入1％甘油时，可溶性蛋白的量达到最大，占 总蛋白的70％左右。 4、经过上述条件优化生产出的hIFN．Y，纯化后，经细胞病变抑制法测定其生物 学活性，其活性达到7．78x105IU／ml。 关键词：人干扰素吖，蛋白表达，可溶性，优化 Abstract Abstract antiviral Interferon-7(IFN-1)is glycoproteinproducedby a．broad-spectrum Tcellsand naturalkillercellsthosewhohavebeen lymphatic stimulated byantigen． Humanisoftenusedinclinicalresearchand becauseofits IFN-7 practice bioactivity， for cell itsstrict example，antivirus，antitumor，controllingapoptosis，andselectivity． NowAmericanFDAhas for clinicaltreatmentIFNindicationsthat givenapproval include5kindsof wet leukemia,acutenessrelated diseases：h岫cell wart，AIDS cabo Candchromc disease．Becauseof也