课题三精子细胞形态建成的调控机制.doc

课题三 精子细胞形态建成的调控机制 图 Afaf蛋白在精子顶体上特异表达 Genotype of mice No.ofmale mice No.of plugged females Pregnancy rate Average litter size Afaf+/+ 5 25 96.00% 12.79 Afaf-/- 10 51 58.82% 9.5 图 Afaf基因敲除后雄性小鼠的生殖力明显降低 5. Guf1是一个基因组编码的线粒体蛋白，以前的研究发现Guf1可能参与线粒体蛋白翻译。通过分析Guf1基因敲除小鼠的表型，我们发现，Guf1敲除后，雄性小鼠完全不育，附睾中精子的数量显著降低，只有正常对照的1/10 左右，而且精子没有活动能力。染色结果显示精子尾部线粒体外鞘的组装有明显缺陷，而且大多数精子的尾部都不完整，发生折断现象。电镜结果显示，精子尾部的线粒体外鞘排列紊乱，而且线粒体的形态异常。这些结果提示Guf1在精子变形过程中尾部的形成有非常重要的作用。我们进一步研究发现缺失Guf1后，线粒体呼吸链上第4复合体消失，而没有影响其他复合体的完整性，说明Guf1可能参与第4复合体完整性的调控。 图 Guf1基因敲除后雄性小鼠完全不育，精子数量明显降低。左上和左下图为对照睾丸和附睾。右上和右下图为Guf1-/-睾丸和附睾。 图 Guf1突变的小鼠精子发生异常，线粒体外鞘组装异常，出现断开，打折等现象。 6. Wt1基因编码一个具有锌指结构的核转录因子，该基因在睾丸支持细胞中有特异表达，以前的研究发现如果在胚胎发育早期的睾丸支持细胞中敲除Wt1会导致睾丸索结构完全破坏，说明该基因在睾丸发育过程中有非常重要的作用。为了研究Wt1在睾丸精子发生过程中的功能，我们利用诱导型的Cre转基因小鼠在睾丸发育成熟后敲除Wt1,结果发现睾丸曲细经管中的生精细胞大量死亡，但是支持细胞没有死亡，这些结果说明Wt1在精子发生过程中有非常重要的作用，失去该基因后支持细胞不能支持生精细胞的正常增殖和分化，最终导致大量生精细胞死亡。这种表型与人类的唯支持细胞综合症非常相似，为了研究Wt1基因突变与支持细胞综合症的相关性，我们收集了500多例支持细胞综合症或者和200例正常对照人群的DNA样品，并对他们进行遗传筛查，结果有7例患者携带Wt1基因编码区的错义突变，这个结果提示Wt1突变可能是导致人类无精子症的致病原因之一。 为了研究Wt1在精子发生过程中的分子作用机理，我们利用基因芯片对基因敲除后睾丸种基因表达的改变进行筛选，结果发现有400多基因的表达发生了改变，经过实时定量PCR验证和功能预测，我们发现两个微丝结合蛋白的表达明显下降，而且以前的研究证明他们在精子发生过程中有重要作用。进一步体外实验证明他们的表达受到Wt1 的调控。 图 Wt1突变后Espin和Actinin (3的表达明显降低 图 在人类无精子症患者中筛查发现了Wt1基因突变 Guf1+/+ Guf1-/-