猪白细胞介素2%2f6嵌合基因的融合表达及活性研究.pdfVIP

第四次猪病学术研讨会会议论文集 猪白细胞介素2／6嵌合基因的融合表达及活性研究捍 闫若潜1’马丈涛1。吴志明一李桂喜2张志凌1张健1盛敏‘刘梅芬1 (1．河南省动物疫病预防控制中心河南郑州450008：2．商丘市动物疫病预防控制中心河南商丘476000) 摘要为了研究高效猪基因工程免疫增强剂，探讨IL．2，IL．6融合蛋白用作疫苗佐剂的免疫增强效果，本研究采 用重叠延伸PcR(SOE．PCR)方法通过一基因柔性接头(Iinker)将猪白介素2(尸D儿一2上6(JPD尼．6，基因构建 成尸。儿一2．砌船r_PD儿一6嵌合基因并克隆入pQE．30原核表达载体中进行融合表达；通过尿素变性．低浓度蛋白复性 EUSA试验方 rPolL．2．1iIlker-PoIL．6蛋白促猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖活，胜；分别采用PoIL．2和PoIL．6 蛋白分子量大小约28 和rPoIL．6蛋白的双重生物学活性，为下一步进行rPoIL．2．Iinker．PoIL．6蛋白在动物体内活性研究奠定了基础。 关键词猪白介素2；猪白介素6；嵌合基因；融合表达；活性 疫苗免疫接种是控制猪传染病的重要手段，但由丁．病原血清犁从多、毒株变异快、部分常规疫 感染后会引起的猪体的持续性感染和猪体免疫抑制等原因，导致猪疫苗免疫失败、免疫保护率低下 et et 等时常发生，给养猪业造成了巨人危害(Molitora1．，1997；WangaI．，2007)。凶此，在安全剂量疫 苗接种下，提高疫莳的免疫力和免疫保护效果对控制猪传染病具肯电要意义。细胞冈子存免疫应答 的产!卜和调肖中具有重要作用，n，作为免疫佐剂提高疫曲的免疫效果、增强动物机体的免疫力，冈 此近年正受到越来越多的关注。 主要提高机体的细胞免疫能力：同时，IL一2也町激活B淋巴细胞，促进抗体分泌，从而具有一定的 促机体体液免疫应答能力；IL．2还可增强n．噬细胞对抗原的递呈能力、杀菌力及细胞毒性，从而发 挥其免疫增强、抗病毒和抗肿瘤作用IIj。IL．2在动物机体的免疫反应中起最要作用，重组IL．2(rII。一2) 能明显提高细菌、病毒和寄牛虫疫苗的免疫效果。因此，IL一2可作为疫苗佐剂增强疫苗的免疫效果， 具有广阔的应用前景[21。 ceIIdifferentiation 白细胞介素6(IL．6)又称为B细胞分化冈了(B factor)，足一种多功能的细胞因子，在调节 2，IFN．p2)及肝细胞刺激因子(hepatocytestimulating 机体免疫应答反应、影响急性期的蛋白应答及造血功能等办面具有币要作用【3】。IL．6由多种小同类 型的细胞产牛，可作用丁．T细胞、B细胞、肝细胞、造血1-细胞和中枢系统细胞等14J。IL一6可以抑制 Thl型细胞的分化而促进TIl2犁细胞分化，能够刺激B淋巴细胞产生免疫球蛋白从而促进机体体液免 疫应答pJ。因此，IL一6具有疫苗佐剂的潜能。 为了探讨IL一2／IL．6用作疫苗优剂的协同免疫增强作用机珲及效果，研究高效猪基冈工程免疫增 强剂，本研究通过基冈linker将猪白介素2(Porcine PoIL一6蛋白在体外具有rPoIL一2和rPoIL．6蛋fI各FI的生物学活性叠加，为进一‘步进行 rPoIL．2．1iIlke卜PoIL．6蛋白在动物体内免疫增强活性研究奠定基础。 8河南省科技攻关计划项目资助(No．082102130008) r作者简介： 闫若潜(197l一)，男，河南南阳人，博士，高级兽医师，主要从事动物疫病病原分子生物学研究， E-嗽il：yrql688@126．com。谢彩华与闫若潜对本文贡献相同，为并列第一作者。 ’“昊志明，通讯作者。E．mail：wIlzhimin96@sina．com． 629 其他论文 l材料和方法 1．1材料 PCR扩增用试剂、DNA同收试剂盒、BamH DNA