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全国第十一次中医诊断学术年会论文集 慢性肾衰中医湿证舌苔、尿液中相关蛋白研究 郝一呜洪名超王忆勤 (上海中医药大学中医四诊信息化实验室，上海201203) 摘要 目的：探讨慢性肾衰患者舌苔、尿液样本中相关蛋白变化与慢性肾衰中医湿证的 相关性。方法：收集慢性肾衰中医湿证及非湿证患者舌苔、尿液样本各30例，另有30例正 常对照组。对所有样本经SELDI—TOF-MS技术测定得到蛋白质谱峰并进行研究。结果：(1) 筛选出慢性肾衰中医湿证组、非湿证组及正常对照组舌苔样本中有43个差异蛋白质谱峰有 统计学意义(PO．01)，尿液样本中有59个差异蛋白质谱峰有统计学意义(PO．01)；(2) 通过建立慢性肾衰中医湿证舌苔蛋白质决策树模型，得到5个差异质谱峰组成的生物标记物 可以将湿证组和非湿证组样品较好地分类(最终决策树模型对所有样品分组判别的正确率为 93．2％，灵敏度为91．9％，特异性为94．6％)。通过建立慢性肾衰中医湿证尿液蛋白质决策树 模型，得到4个差异质谱峰组成的生物标记物可以将湿证组和非湿证组样品较好地分类(最 终决策树模型对所有样品分组判别的正确率为91．4％，灵敏度为86．2％，特异性为96．5％)。 结论：该研究从生物学角度来探讨中医湿证，为中医湿证辨证提供客观依据。 关键词慢性肾衰；中医湿证；舌苔；尿液；蛋白质组学 慢性肾功能衰竭(简称慢性肾衰，CRF)是肾脏病中的常见病，发病率高且预后严重。 中医药治疗本病具有独特优势，但其临床辨证诊断尚缺乏中医特色的客观指标。 湿证是中医常见证型之一，并与慢性肾衰的发生、发展关系密切。舌苔、尿液能反映 人体生命活动过程中所产生的生理病理信息，对中医湿证意义明显。研究证候的蛋白质表 达图谱，理论上可从生命活动的本质上揭示证候的实质。查阅近10年有关中医湿证、舌苔 和尿液蛋白质组学方面的文献发现，有关慢性肾衰中医湿证的舌苔及尿液蛋白质组学的研 究鲜有报道。鉴此，本研究运用蛋白质组学、质谱技术、生物信息学等多学科技术，对慢 性肾衰湿证舌苔、尿液中相关蛋白质变化与慢性。肾衰中医湿证的相关性进行了探索性研 究。 1资料 1．1研究对象 于2009年1月2010年1月在上海中医药大学附属龙华医院肾病科门诊和病房，依 据《中药新药临床研究指导原则》(试行)中慢性肾功能衰竭的诊断标准及中医湿证、非 湿证的辨证标准…，收集到已获知情同意的慢性肾功能衰竭中医湿证患者30例，非湿证 患者30例；另有正常对照组30例，为明确排除各种疾病的上海中医药大学在校教师及上 海市疾病预防控制中心职工。经统计年龄、性别、病程和肾功能比较各证型之间无显著性 差异(D0．05)，具有可比性。 基金项目：上海市教委科研创新项目(08ZZ63)；A：海市第三期蘑点学科经费资助项目(S30302) 作者简介：郝一鸣(1983一)，男，安徽马鞍山人，实验师，硕士，研究方向：中医证候标准化研究。 通讯作者：王忆勤11962一)，女，浙江宁波入，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中医证候标准化研 究。 269 全国第十一次中医诊断学术年会论文集 1．2主要试剂及仪器设备 蛋白芯片：NP20、H4，美国；Bradford蛋白质定量试剂盒：TIANGENBIOTECH(BEIJING) CO，LTD．目录号：PAl02；三氟乙酸(TFA)、乙腈(ACN)、PBS(PH 7．0)、去离子水等购自 美国Sigma公司；蛋白芯片仪：Ciphergen，PBSII，美国。 2方法 2．1样本处理 参考本课题组舌苔上清液中蛋白质的提取及优化方法盥1，对舌苔样本采用1500 r／min，2min的离心条件处理后取上清液。 对尿液样本对采用3000 r／min，lOmin的离心条件处理后取上清液。 2．2样本检测 舌苔、尿液样本分别选用NP20、H4蛋白芯片加样，将芯片置于SELDI-TOF质谱阅读 器中，用加有Al卜in—one标准蛋白质的NP20芯片校正仪器至O．1％范围内。芯片阅读仪 参数设置如下：激光强155，探测器检测灵敏度