增强型绿色荧光蛋白标记技术对骨折后骨髓间充质干细胞的迁移示踪.pdfVIP

1·02 · Ch inese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, 2006, V o l 20 (2) 增强型绿色荧光蛋白标记技术对骨折后 骨髓间充质干细胞的迁移示踪 1 1 2 3 1 段小军 　杨柳 　周跃 　辛榕 　李起鸿 　　【摘　要】　　 目的　采用增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluo rescent p ro tein , EGFP ) 标记技术, 对外源性骨 髓间充质干细胞( , ) 迁移至骨折区域进行示踪, 为骨修复中干细胞作用机制的研究 m arrow m esenchym al stem cells M SC s 创造条件。　方法　EGFP 标记 日本大耳白兔M SC s, 部分标记细胞经成骨诱导培养后检测其细胞表型。另取日本大耳白 兔 18 只制成双侧尺骨骨折模型, 随机分为实验组与对照组, 每组 9 只, 分别于术前 24 h、术后 1 和 24 h , 将扩增的标记 7 和未标记 以 1 ×10 个 剂量分别注入实验组和对照组的耳缘静脉; 术后 48 处死动物, 取左侧尺骨断端 M SC s M SC s kg h 组织行冰冻切片、荧光显微镜观察, 右侧样本组织固定后行石蜡切片、 染色、光镜观察。　结果　 培养后分化及 H E M SC s 表型良好, 标记M SC s 仍具有较快的增殖能力, 经成骨诱导培养后, 可表达碱性磷酸酶, 并具有钙结节形成能力; 兔体内 实验术后 48 h 动物均存活, H E 染色见骨折断端为血肿组织。术前 24 h、术后 1 和 24 h 静脉注入标记细胞后均可在骨断 端组织中观察到 EGFP 阳性细胞, 而对照组则未见 EGFP 阳性细胞。　结论 　兔M SC s 经 EGFP 标记后仍然具有成骨 细胞诱导能力; EGFP 示踪技术提示, 静脉途径给予标记的M SC s 可以迁移聚集到骨折区域的血肿组织内。 【关键词】　　骨髓间充质干细胞　　骨折　　荧光蛋白　　示踪 中图分类号: 68341　 813　　文献标识码: R Q A APPL ICATION OF ENHANCED GREEN FL UORESCENT PROTE IN LABEL ING TECHNOLOGY TO MON ITOR ING