固相萃取一离子色谱一积分脉冲安培法测定人血清中游离氨基….pdfVIP

第35卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第7期 2007年7月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 1063~1066 固相萃取一离子色谱一积分脉冲安培法测定人血清中游离氨基酸 周政华，杨元2洪君蓉，黄承钮” 李河君 ‘ ，(四川大学华西公共卫生学院营养与食品卫生学教研室，成都610041) 2(成都市疾病预防控制中心，成都610041) 摘 要 比较了磺基水杨酸和无水甲醇沉淀人血清中蛋白质的效果，优化了国产732型阳离子交换树脂进行 固相萃取净化的条件和Dionex-60〕离子色谱分析系统的梯度淋洗条件。用该离子色谱仪检测了谷氨酞胺等 14种氨基酸，结果表明，峰面积一浓度的校正曲线的相关系数为0.9900-0.9995，检出限为0.02-0.59mg/L; 峰面积的相对标准偏差为1.9%一10.4%;回收率为80.6%一114.8%o 关键词 固相萃取，离子色谱，积分脉冲安培法，血清，氨基酸 1 引 言 血清中游离氨基酸与疾病尤其是与肿瘤的关系愈来愈受到人们的关注。蛋氨酸、谷氨酞胺等氨基 酸与胃癌等肿瘤生长关系密切，并对肿瘤的治疗影响较大’〔〕。因此，建立血清中的游离氨基酸准确的 定性定量分析方法，在疾病的早期诊断和临床治疗指导中具有重要意义。 目前，分离和测定氨基酸的方法主要有柱后衍生阳离子交换色谱一光谱检测法、柱前衍生反相高效 液相色谱一光谱检测法和毛细管电泳法。这些方法都存在衍生物不稳定、形成多种衍生物和操作麻烦等 缺点[[2,31。阴离子交换色谱一积分脉冲安培法是近年来的发展起来的先进的氨基酸分析方法，该方法不 需要柱前或柱后衍生，直接进样测定。方法简便，能得到较为满意的定性定量结果川;该方法可用于食 品、茶叶、细胞培养液和发酵肉汤、气溶胶、鱼粉和玉米粉等样品中的氨基酸测定5-〔810 实验表明，血清中的蛋白质会附着在色谱柱上，降低柱效，影响分离;葡萄糖等糖类在积分脉冲安培 检测器上所产生的响应会掩盖赖氨酸等氨基酸的色谱峰[[51，造成干扰。因此，血清样品的前处理非常 重要。本实验用磺基水杨酸沉淀蛋白质，再用国产732型阳离子交换树脂固相萃取法吸留氨基酸而去 除糖类，最后用Dionex-600离子色谱仪分析，排除了蛋白质和糖类对测定的干扰，取得了满意的结果。 2 实验部分 2.1仪器与试剂 美国戴安公司Dionex-600离子色谱仪，包括在线脱气装置的GS50组分泵、AS50色谱柱箱(内含 AminoPacPA10阴离子色谱柱，包括分析柱和保护柱)和ED50电化学检测器(装有薄层型安培池)。安 培池包含一支金电极、A岁AgCI(3mol/LKCI)参比电极和包含池体的钦对电极。电化学检测池也置于 AS50稳热室中以控制温度。色谱系统的控制、数据获取、数据分析都用PeakNet6.40软件执行;飞鸽牌 台式离心机 (TGL-16B,16000r/min，上海安亭科学仪器厂)。 磺基水杨酸(AR级，上海精析化工科技有限公司)，应用浓度37.5g/L;氨水，AR级，氨气含量 25%一28%(成都露澄化工制剂厂)。无水甲醇，优级纯(成都科龙化工试剂厂)。实验用水均为电阻率 为18.2MSZcm超纯水。 流动相A，超纯水;流动相B,250mmol/LNaOH溶液(戴安公司专用试剂);流动相C,1.0moUL醋 酸钠(NaAc)溶液(戴安公司专用试剂)。3种流动相都保持在N:中以阻止空气中的co:的蓄积。 国产732型阳离子交换树脂的处理:称取约100g树脂(广东西陇化工厂)，清洗3一5次，用100mL 2006-09-06收稿;2007-03-29接受 *E一二 1;hcynuph@163.com 1064 分析化学 第35卷 饱和NaCl溶液浸泡过夜，缓慢稀释，清洗;然后依次用乙醇(5+95)、盐酸(5十95)和25g/LNaOH溶液 浸泡过夜;最后用HCl(5+95)反复浸泡3次，用去离子水清洗至pH近3.0，备用。取3ml,固相萃取小 柱空柱(Supelco公司)，用1.5mL处理好的树脂填柱，上下各垫一片隔板，压紧，无气