蜜蜂巢脾抗氧化活性与抗菌活性的研究.pdfVIP

蜜蜂巢脾抗氧化活性与抗菌活性的研究木 褚亚芳，胡福良“ (浙江大学动物科学学院，杭州310029) 摘要：以意蜂巢脾和中蜂巢脾为研究材料，分别采用水提法和醇提法处理，对获得的4种 提取物，以DPPH·法测定自由基清除能力，福林酚法测定总酚含量，琼脂扩散法测定其对金黄色 葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌半径。结果表明，巢脾提取物具有一定的抗氧化活性和抑菌活性，且 含有丰富的酚类化合物。除了对大肠杆菌的抑制作用外，巢脾水提液效果优于巢脾醇提液；除 DPPH·清除能力外，意蜂巢脾效果优于中蜂巢脾效果；生物学活性呈现浓度依赖效应。本研究为 巢脾在中医药领域的应用提供了一定的解释，并证明了巢脾是一种潜在的天然生物资源。 关键词：中蜂巢脾；意蜂巢脾；DPPH·；总酚含量；抑菌活性 巢脾，是指由蜜蜂筑造的双面布满巢房的脾状蜡质结构，是蜜蜂栖息、繁衍育子、贮存酿造 食物的场所【lJ。由于茧农的堆积以及蜂产品储存后的残留，随着培育蜜蜂世代的增加，巢房的颜 色由白色或者淡黄色转为褐色甚拿黑色，巢脾的成分也变得相当复杂。 巢脾是一种中国民间传统药物，用于治疗或者辅助治疗鼻炎、肝炎、支气管炎、风湿性关节 炎、牙周炎、皮肤病等，但是目前对巢脾整体的牛物学活性和药理药效研究却十分匮乏。一些研 究者认为蜜蜂巢脾与有着悠久药用历史的中药蜂房(也称为露蜂房)功效相似。蜂房为胡蜂科昆虫 果弓蜂、日本长脚胡蜂仔或异腹胡蜂的巢【2】，在抗龋齿、调节机体免疫力和抗肿瘤方面均有一定 cerana 功划3~5|。本实验通过研究中华蜜蜂(Apiscerana)巢脾和意大利蜜蜂似．melliferaligustica) 巢脾的水提液和醇提液的抗菌、抗氧化活性，以及总酚含量的测定，一方面探究不同品种蜜蜂巢 脾生物学活性的差异，以及不同提取溶剂对巢脾生物学活性的影响；另一方面，为巢脾的药理研 究提供理论基础，为巢脾的进一步开发利用提供实验根据。 1材料和方法 1．1主要材料和试剂 意蜂巢脾(使用一年以上)：由杭州蜂之语蜂业股份有限公司有机蜂场提供： 中蜂巢脾(使用一年以上)：由浙江省金华市人阁养蜂专业合作社提供； 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌，由浙江省中医药研究院提供； ·国家蜂产qk技术体系建设专项资金资助项目(NYCYTX．43) ”通讯作者，Tel／Fax：0571 E—mail：flhu@zju．edu．crl 52 BASIC 药集团化学试剂有限公司)：没食子酸(BIO INC．)。 1，2主要仪器 UV-2550型光谱仪(口本岛津公司)；KQ一500E型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)； 平(DENVERINSTRUMENT)；游标卡尺(广陆数字测控股份有限公司)等。 1．3方法 1．3．1巢脾提取液的制备 98。C水浴)／95％乙醇提取24h(固液比1：6(W-V)：{42h超声波清洗仪处理10min，芡5次1 ◆过滤 ◆除蜡 ，浓缩 ，一18℃f泶仔 滤渣莺新提取多次，获得4个样品，分别为：意蜂艇牌水挺液(Mw)：中蜂巢脾水提液(Cw)； 意蜂巢脾醇提液(Me)；中蜂巢脾醇提液(ce)。 1．3．2巢脾提取物清除DPPH自由基的能力 ml 取2 DPPH乙醇溶液(125 pM)与1．6ml的95％乙醇混合，加入400pl巢脾提取液，混 合均匀，室温避光精确反应60min之后，在517nm波长下测吸光值。以抗坏血酸和BHT作为 参照，实验重复3次。样品对DPPH自由基清除能力以EC50表示，即清除50％DPPH自由基所 需要的抗氧化剂浓度，通过绘制抑制率一提取物浓度曲线得到【6】o 抑制率的计算公式如下： l 00％ K=[1一(Ai—Aj)／Ac]x Ai=2．0ml 式中： DPPH溶液+1．6ml95％乙醇+0．4ml待测溶液的吸光度值 ml95