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全封闭式蛋鸡舍夏季自动化喷雾消毒研究 程菡 王红宁 邓春朋 四川大学生命科学学院，动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室， “985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台，生物资源与生态环境教育部重点实验室 610064 本研究以全封闭式蛋鸡舍为实验基地，建立了全封闭式自动化喷雾蛋鸡舍的夏季消毒规程。在实 验室以鸡标准病原菌株为实验材料，根据从市场购买的13种消毒剂的MIC值测定结果，筛选消毒药物。选用鸡场 常用消毒剂拜安 （10％癸甲溴铵）以不同浓度、剂量对全封闭式自动化喷雾鸡舍进行喷雾消毒。根据空气中细菌 总数随时间的变化规律筛选出最佳消毒浓度与剂量，建立全封闭式自动化喷雾蛋鸡舍夏季消毒实验规程。全封 闭式自动化喷雾蛋鸡舍夏季消毒最佳程序为：拜安 （10％癸甲溴铵），稀释至浓度为83mg/L，消毒剂量为6ml/m3，一 周两次带鸡消毒。本次试验结果与其他研究比较表明，全封闭式蛋鸡舍夏季自动化喷雾消毒的剂量明显低于其 它研究。本实验结果为指导全封闭式蛋鸡舍科学合理消毒，提供了科学依据。 全封闭式蛋鸡舍；夏季；自动喷雾；消毒 第三篇疾病防治 生化培养箱：光学显微镜：电热鼓风干燥箱：水浴振荡器：电子天平：微量移液器：高压灭菌锅：超净工作 台：安德森空气微生物采样器：蒸馏水仪：弱酸性电解水仪：电磁炉：平板：锥形瓶。 北京奥博星生物技术有限公司营养琼脂培养基、无水乙醇、市场上随机购买13种消毒剂安立消(10％ )、百毒杀(10％癸甲溴铵)、百菌灭(双辛基、癸基二甲基氯化铵)、碘伏(碘)、复合酚(酚、醋睃、十二烷 基苯磺酸)、新大卫(戊二醛、增效剂)、过氧乙酸(过氧乙酸)、新吉尔灭(苯扎溴铵)、甲酚皂(甲酚)。 1．3主要方法 1．3．1 13种消毒剂MIc值的测定和消毒剂的选取 1．3．1．1标准菌株菌悬液的制备 按《消毒技术规范2002年版》的要求取标准菌株在无菌超净工作台中 打开，加入灭菌生理盐水混匀。取5mLIOmLLB培养基加入灭菌试管内，使用接种环接种少量的菌种悬液于 试管内，置于37℃水浴培养18h--24h。 稀释法计数后稀释至1．O×108CFu／IIlL。 1．3．1．2活菌培养计数选择适宜稀释度试管，吸取其中混合均匀的悬液1．OmL力l于无菌平皿内。每一稀 释度接种3个平皿，接种23个不同稀释度，置于37。C温箱内培养，计算平板上的菌落数。将求得的平均菌 落值，再乘以稀释倍数，即得每毫升原样液中的菌量。 1．3．1．3最小抑菌浓度测定(MIC) 将消毒剂用灭菌后无菌硬水做对倍稀释成1：10、l：20、1：40、1：80 液接种于含消毒剂的营养肉汤的试管t扣，作为试验组样本。以同样方法将细菌悬液接种不含消毒剂的营养 肉汤的试管中并加入2．5mL的无菌蒸馏水，作为阳性对照组样本。取2支含营养肉汤的试管加入无菌硬水， 48 作为阴性对照组样本。每个实验做3个重复，37。C h后观察抑淆效果，肉汤混浊判定为阳性：肉汤清澈判 定为阴性。能抑制细菌生长繁殖的消毒剂的最高稀释倍数为此消毒剂对试验菌的最低抑菌浓度(MIC)。 1．3．1．4消毒剂的选取 选取抑菌和杀菌浓度较低的消毒剂，选择使用较为方便性、无刺激或低刺激 性、无残留污染、对人体无毒无害的消毒剂作为本次实验的消毒剂，在其他方面差异不大的情况下，选择 低性价比的消毒剂。 1．3．2规模化封闭式鸡场夏季消毒规程的研究 1．3．2．1鸡舍空气中细菌总数的测定 使用多级撞击式安德森空气微生物采样器来采集空气中的微生 物，在鸡舍内选取中央料线长度的中点，在鸡舍内取对角线，k与另两条料线相交的四点共五点作为测试 脂培养基平板：将采样后的培养摹放入37℃培养箱中培养24～48h。 采样后，培养皿放37℃恒温培养箱，培养24～48h后记录培养皿细菌菌落数。 1．3．2．2最佳消毒程序建立 鸡场常用消毒剂拜安(10％癸甲溴铵)以不同浓度、剂量对全封闭式自动化 分别根据空气中细菌总数随时间的变化规律估算不同条件下舍内空气中细菌含量达到国家行业标准规定 347 四川省畜牧兽医学会2012