微生物实验-平板菌落计数与菌种分离纯化技术.pptVIP

实验七、菌种分离纯化与平板菌落计数 二、实验原理 土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落。可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。 三、实验内容 （一）土壤样品的采集 采样一般定点于距离土表1－20cm处，先除去表土1－2cm，以无菌铲采土并用无菌塑料袋分装。 （二）微生物平板菌落计数及分离纯化 1、制备土样稀释液 （1）称取1g土壤，加至100ml无菌水中，充分振荡15分钟，使土壤颗粒完全打散，土壤中的微生物充分分散到土壤溶液中去。 （2）无菌操作，系列稀释至10-8 。 ③培养 倒置于28℃培养箱中培养3~5d； 注意：要有无菌水的对照（CK）！ ④计数 培养48h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落，并按下列公式进行计算： 每克土样中细菌数＝同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数 3、 平板划线分离法 （1）倒平板 按稀释涂布平板倒平板，并用记号标明培养基名称，土样编号和实验日期； （2）划线 在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取上述的土壤悬液一环在平板上划线。划线的方法很多，但无论采用那种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落； （3）菌种转接 取单菌落，转接至试管斜面，37度，培养24小时。保存备用。 （三）培养基的制作 乳糖蛋白胨培养基（300ml） 配方：蛋白胨：10.0g 4.0g 牛肉膏：3.0g 1.2g 乳 糖：5.0g 2.0g NaCL： 5.0g 2.0g 溴甲酚紫乙醇溶液 0.4ml 水： 1000ml 400ml 分装：40支18×180㎜试管 10ml/管 住：先加杜氏小管再分装 液面略高于杜氏小管 四、实验报告 1、计算土壤样品中细菌、真菌的含量。 2、常见的微生物分离纯化的方法及原理。 * * 实验内容 实验一、显微镜的使用与单染色法 实验二、革兰氏染色与荚膜染色 实验三、放线菌形态观察与芽孢染色 实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征 实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术 实验六、培养基的制备 实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数 实验八、水质微生物学检测 实验九、消毒与灭菌技术 一、实验目的 1、 学习并掌握平板菌落计数的技术方法 。 2、学习并掌握微生物分离纯化技术方法。 3、 了解土壤微生物区系的组成。 2、平板菌落计数 （1） 平板涂布法①倒平板 将培养基（PDA）加热融化，待冷至45~50℃倒平板，每种培养基倒三皿；②涂布 用无菌吸管分别由10-4，10-5，10-6三管土壤稀释液中各取0.1ml加入培养皿，用玻璃涂棒涂匀并做好记号； （2）、倾注平板法 ①样品制备（土样稀释）同上 ②取样 用三支1ml无菌吸管分别吸取10-6、10-7和10-8的稀释菌悬液各1ml，对号放入编好号的无菌平皿，每个稀释度放3个平皿。 ③倒平板 向上述平皿中倒入45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基约15毫升/平皿，水平迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。待培养基凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养。注意：要有无菌水的对照（CK） ④计数 培养48h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落，并按下列公式进行计算： 每克土样中细菌数＝同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数