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结核分枝杆菌的基因网络研究与新功能基因的发掘 何正国 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室 一、报告相关的研究背景 蛋白质和核酸是构成生命体最为重要的两类生物大分子。 细胞的各种重要生理过程都 是以蛋白质及核酸等生物大分子间的相互作用为纽带的。蛋白质与蛋白质、蛋白质与核酸之 间的相互作用是基因网络调控的重要形式，也是分子生物学长期以来研究的中心问题之一。 剖析病原微生物生物大分子之间的相互作用关系，对于深刻揭示其分子致病机理、系统发掘 新功能基因和新药靶具有重要意义。 曾经蔓延全球的肺结核是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)通过空气传播 感染人而引起的，20世纪因医药事业的进步而消退，并且其全基因组也完成了测序。但是， 已被大多数人淡忘的肺结核近年来又“死灰复燃”，并成为世界范围内致人死亡数量最多的 传染病。目前，全球2000万结核病人，95％在发展中国家，每年有40多万耐药型结核新病例 出现，世卫组织宣布“全球结核病进入紧急状态”，呼吁采取紧急措施加强对结核病的防制。 尽管目前对常见结核病尚能有效处治，但变异的新型菌株常具有多重耐药性，能够快速在人 群中传播和蔓延。耐药型结核病在中国农村尤其西部地区更为严重，对公共卫生和人畜健康 已形成了极大的威胁。因此，深刻理解结核病原的分子机理，发现新功能基因与新药靶，防 治结核病蔓延是我国目前必须面对和迫切需要解决的重要课题。 二、研究意义和目标 结核病原菌与宿主的相互作用是感染与致病的根本基础。当病原菌侵染宿主时，环境中 各种营养物质的含量、种类、以及温度、渗透压与酸碱度等因素的改变，以及宿主对细菌的 抵抗，必然对细菌的生存施加巨大的压力。为了生存，结核分枝杆菌必须快速地感应环境中 各种因素的变化，相应地调节其生理、生命行为，进而适应新环境并逐渐在宿主体内寄生和 繁殖。细菌的这种复杂的生物学过程与其参与这些过程的生物大分子特异性的相互作用密切 相关。因此，研究蛋白质．蛋白质、DNA．蛋白质等生物大分子之间的相互作用对于在分子水 平上深入理解结核分枝杆菌感染与致病机理至关重要。特别是近年来的研究表明，基于结核 菌自身的蛋白质．蛋白质以及蛋白质．DNA等生物的分子之间特异性的相互作用来发掘新功 能基因，发现新药靶是一个重要途径。同时，对于结核分枝杆菌这样的特殊病原菌而言，其 高致病性、传染能力强、不容易控制以及生长缓慢等特点使得在病原体中直接研究和寻找它 的新功能基因非常困难。因此，使用安全的体外方法建立一个全局性的结核分枝杆菌的基因 调控网络，对于系统、安全、有效地发掘其新调控基因，发现新药靶具有特别重要的意义。 目前，国际上尚未见报道通过实验的方法大规模构建结核分枝杆菌的全局性基因调控网 络。本人近年来主要从事DNA复制、转录等重要生命过程的生物大分子相互作用机制及创 新技术体系研究，在复制起始蛋白的功能、复制体核心组分蛋白相互作用机制、以及生物大 分子相互作用研究新技术等方面取得了重要进展。特别是2009年，我们在结核分枝杆菌的基 因调控网络研究方面取得了重要突破，基本建立了体外研究该病原菌基因调控网络(包括蛋 白质．蛋白质、蛋白质．DNA相互作用)研究创新技术体系和平台。这些主要包括完成了结核 分枝杆菌的ORF组克隆和精细文库的构建(何正国等国家发明专利，2009)；建立了蛋白质． ct 蛋白质相互作用网络研究生物信息技术平台(CuialandHe ZG，BMCGenomics，2009)； 建立了DNA．蛋白质相互作用和基因表达调控研究的新型细菌操作平台(GuoetalandHe ZG． GenomeRes，2009)；初步完成了结核分枝杆菌的全局性蛋白质相互作用筛选，获得了一大 批具有相互作用的共转化子。此外，最近依托单位华中农业大学结合21 l-l-_程规划的任务， lg 建成先进的蛋白质组学研究设备平台(本人负责筹建)。这些为我们全面开展