小干预RNA对人乳头瘤病毒6bE6基因的沉默作用.pdfVIP

维普资讯 生 廑 盘查 4生 !鲞箜 期 』 erma—tol,N—ovember2 ， !! 1l 625 · 论 著 · 小干预RNA对人乳头瘤病毒6bE6基因 的沉默作用 赵可佳 程浩 丁佳逸 张行 摘【要】 目的 探讨小干预RNA(siRNA)对稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)6bE6基因的细胞株中靶 基因的干预作用 。方法 建立并筛选稳定表达靶基因HPV6bE6的阳性细胞株，分别设计同源于 HPV6bE6基因的不同序列的4对siRNA，采用实时定量 PCR技术检测 siRNA转染前后细胞内靶mRNA 的表达情况。结果 转染细胞中HPV6bE6基因表达最低有 90％以上被抑制，低浓度siRNA水平(1nmo1]L ～ 150nmol／L)即能有效抑制靶基因表达 ，靶mRNA的沉默于转染siRNA后24h达到最强 ，且至少可维持 4d 结论 siRNA—HPV6bE6可以高效、特异地沉默HPV6bE6基因．可能为治疗HPV6b型感染提供实验 室依据。 关【键词】乳头状瘤病毒，人；基因沉默；小干预RNA Selective Silencing ofViralGeneExpression in HPV6bE6一positive CellLineTreated with Specific s=1IlNA zHAOKe—Jt，CHENGHGO，DlNGJia-yi，ZHANGXing．*DepartmentofDermatologyand Venereoloyg,SirRunRunShawHospital，MedicalCollege，ZhejiangUniversity,Hangzhou310016，China A【bstract】Objective ToinvestigatetheinhibitionofpathogenicviralgeneexpressioninHPV6bE6一 positivecell1inebyspecificsiRNA． whichmighthavegreatpotentialforclinicaluse． M ethods Bl6cells weretransfectedwithrecombinantplasmidpcDNA3．1(+)一GFP／HPV6bE6．andthepositivecellcloneswere selectedbyfluorescenceproteinobservationandRT—PCR．FourspecificsiRNAs．noneofwhichshareshomol— ogywithexonsofknownhumangenes，weredesignedandsynthesizedtotargetHPV6bE6mRNA．Quantitative real—timePCRwasperformedtomeasuretheinhibitionratesoftargetgeneexpressionbycomparingHPV6bE6 mRNA concentrationsbeofresiRNA transfectionwith thoseaftertransfection． Theinhibitionratesoftarget geneexpressionwithdifferentsiRNA concentrationsof0．2nmol，L，lnmol，L，l0nmol，L，50nmol，L．150nmol／I andwithdifferenttreatmenttimeat24h，48h． 72hand96haftertransfeetionweremeasuredrespectively． Results Morethan90％ reductionofHPV6bE6 mRNA wasobservedfollowingtreatmentwith HPV6bE6一 siRNA，andHPV—negativecellswereapparentlyunaffectedbyHPV6bE6一siRNA．ThedecreaseofHPV6bE6 mRNA wasmaximalat