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遗传 HEREDITAS(Beijing)17(4):1-31995 ·遗 传 快 报 · 一个Hunter综合征家系粘多糖电泳分析① 宋光江② 李桂信 季启清 孙安堂 宋兴军 杜克明 刘京升 （山东省泰山医学院生物教研室，泰安271000) 摘 要 CT所见肝脏肿大占据左右上腹，纠正了既往把肝左叶当做脾大的结论；B超发现前所没有报道 的二尖瓣赘生物将给患者终生致残；标准品DS行双向电泳．首次发现其分离为DS。与GS：两个斑点； 杂合子、患者尿GAG均出现DS。斑点，而正常人则不出现．实验显示，DS,的出现在杂合子检出和患 者确诊上有重要意义． 关健词 Hunter综合征，粘多糖，双向电泳 AnElectrophorenalInvestigationofGlycosaminoglycans inHunterSyndromeFamily SongGuangjiang LiGuixin LiQiging SunAntang SongXingjun DuKerning LiuJingsheng (BiologyDepartment,TaishanMedicalCollege,Taian,Shandong271000) Hunter综合征家系 （图1)，已追踪10年 ’，〔，其上、下4代共10名患者，表型正常的女性也往往是杂合 子．家系在扩大，患者在增多．该遗传病连街坊邻居都望而生畏．患儿母亲多次咨询，盼求了解 自身情况及如何 避免患儿出生问题．鉴于此，特对该家系患者、肯定杂合子的尿液进行电泳分析，以试图检出杂合子． 图IHunter综合征家系 I材 ‘料 与 方 法 1.1材 料 ①本课题由山东省计生委资助，本工作已获国家计生委94年科技进步三等奖． ②宋光江，男，57岁，副教授．主要从事细胞遗传学研究． 2 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1995 17卷 1.1.1体检 班-1,4,5,8,13，分别为26,22,20,23,14岁，其成年者身高均在110cm左右，已丧失劳 动能力．所有患者均神志清楚，鸭行步态，舟状头，发粗硬，蛙状突眼，角膜透明，听力减低．III-1,4,5,8 心尖3/6级吹风样收缩期杂音．CT所见：II1-4,5,13头部脑回、脑室、脑沟结构正常，肝大占据左右上腹， 将正常脾脏挤至左后方．B超所见：皿-4,5,13，均见心脏二尖瓣前叶左房面赘生物，其大小分别是：1.3x 1.2cm;1．1x1.Ocm;0.5x0.5cm. 1.1.2尿样 正常人尿取自5-50岁人晨尿，该家系中取6例肯定杂合子 （II-2,5,7和III-2,6,9)和9 例患者 w（一l,4,5,8,、13和Iv一1,2,3,4）晨尿． 1.2试 剂 1.2.1标准品粘多糖 (GAG)溶液 DS 硫（酸皮肤素）、HS 硫（酸类肝素）、CS 硫（酸软骨素）为Sigma公 司产品，HA 透（明质酸）为中国医学科学院基础医学研究所遗传室赠．以上样品分别用蒸馏水配成 1mg/ml, 置4℃保存． 1.2.20.05％阿尔新蓝溶液 以含50mmol/L氯化镁和SOmmol/L醋酸钠溶液配制，pH5.8. 1.2.3 4mol/L氯化钠一甲醇混合液 用时按4mol/L氯化钠一甲醇为2：1混合． 1.2.4 0.02mol/L碳酸钠溶液 将 1.06g无水碳酸钠溶于500m]蒸馏水中． 1.2.5 第1向电泳缓冲液 按毗咙一醋酸一蒸馏水为100:10:890混合使用，pH6.0. 1.2.6 第11向电泳缓冲液 0.15mol/L醋酸锌溶液，pH5.8. 1.2.7 洗脱液 含500mmol/L氯化镁和500mmol／L醋酸钠水溶液，pH5.8. 1.2.8 无水乙醇． 1.3方法 7（,S) 1.3.1GAG提取和纯化 尿液经水浴沸腾5分钟，以除去蛋白质．然后取尿液2m1，加人20m1阿尔新蓝溶 液，混匀，室温静置数分钟，离心 3（000r/m)20分钟，弃上清液，在沉淀物中加人4mol/L氯化钠一甲醇馄 合液0.3ml，