中华蟾蜍肝苯丙氨酸tRNA的纯化及其生物活性.pdfVIP

遗 传 学报， 11(6);44845591984 ActaGeneticaSinica 中华蟾蛛肝苯丙氨酸tRNA的纯化 及其生物活性” 廖 锦 民 〔中国科学院上海细胞生物学研究所） 本文介绍一种改进的酚抽法制备蟾蛛肝总 tRNA和BD纤维素柱纯化 tRNAPhe的简便方 法。270g蟾蛛肝可制备466mg总 tRNA。总tRNA的产率是未改进的酚抽法的8--11倍。总 tRNA经两根BD纤维素柱纯化所得tRNAPhe的酚化活力达13354pmoles苯丙氨酸／A26otRNA3 它的荧光光谱测定表明，这个 tRNA分子存在Y碱基。 自Holley于1965年首次测定酵母丙氨酸tRNA一级结构以来，由于 tRNA分离纯 化方法的改进和核营酸序列分析技术的突破，这方面的研究进展极快，截至1982年初，已 测定了230个来自不同种属的tRNA的一级结构[14［1。 目前，采用BD一纤维素柱层析[31［ RPC-5反相柱层析10〔1、固相快速分离法、反相盐梯度层析法51「，以及其他多种技术的配合， 成功地分离了不同来源的 tRNA及其同功异构体。 最近一些研究表明，真核生物的tRNA基因是研究真核基因转录调控的一个比较简 单的理想的对象’］［。因此，真核 tRNA基因的研究也较引人注目。其中以非洲爪蟾的苯 丙氨酸tRNA(tRNAp,e）基因和酪氨酸 tRNA基因81〔、果蝇的丝氨酸 tRNA基因和撷氨酸 tRNA基因的研究[z1［较多。在研究真核 tRNA基因调控的工作中，需要单一的、匀一的 tRNA作为基因探针。本文报道了一个改进的酚抽法制备蟾赊肝总 tRNA和BD一纤维素 柱纯化 tRNApne的简便方法。总 tRNA 的产率比未改进的酚抽法增加8-11倍，纯化 的 tRNApne酚化活力高，纯度好，可作为 tRNApne基因的探针。 材 料 和 方 法 一（）材料 中华A0, (Bufobufoasiatious）系上海地区捕捉。蟾赊肝按常规方法 取得。 （＝＝）试剂 BD一纤维素 (BoehringerMannheim 产品）。14C一苯丙氨酸(450mCi/ MMol), ℃‘一小球藻蛋白水解液 5（0mCi/mmol) （中国医学科学院放射医学研究所产 品）。ATP(Sigm。产品）。其他化学试剂均系分析纯。 三（）中华蟋蛛肝总 tRNA 的纯化 分离步骤如图10 （四）蟾蛛肝 tRNApbe的纯化 1.BD一纤维素柱1(BD-1柱）层析 层析柱 （1.7X18cm）用含0.4MNaCl缓冲液 本文于 1983年8月3日收到。 1)王建业同志参加部分工作。申庆祥、余允华同志提供部分鼠肝酸化酶，并予支持和帮助，谨此致谢。 6期 廖锦民：中华蟾赊肝苯丙氨酸 tRNA 的纯化及其生物活性 449 2709蟾蛛肝 toadliver l 十1．5倍体积缓冲液 A(0.14L e e MNaAcpH4．5) ＋1．5倍体积缓冲液A饱和的 苯酚，匀浆，离心，分相V 十 1．5volumes of buffer 矛 、 ‘ 0．14M NaAc}pH4，5) 十 1。5volumes 0t phenolsaturatedwithbufferA,homogenized,centrifuged ｛ 上相水｛溶液 下，目1酚液 Upperaqueousphase Lowerphenolphase